当前免疫学研究多采用免疫健全的小鼠模型,小鼠原代免疫细胞已成为关键工具。 然而,小鼠原代免疫细胞的基因转染一直面临低效率、高死亡率等技术难题。 现有的转染方法 (如慢病毒、电转、脂质体等) 在这些细胞中效果不佳,特别是在基因编辑等涉及大片段基因递送的研究中,这一瓶颈尤为明显。
为突破这一技术难关,西湖凝聚体与西湖大学的研究团队联合开发了ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫细胞转染试剂盒。该创新系统采用全新核酸递送策略,成功解决了传统方法的局限,能够 高效递送大片段核酸,实现小鼠原代免疫细胞的高效基因编辑。
用户亲证:在小鼠原代 T 细胞中实现高达 97% 的基因编辑效率
图1. ProteanFect CRISPRMax实现在小鼠原代T细胞的高效基因编辑
上述结果来源于陆军军医大学的研究者,研究中使用了 ProteanFect CRISPRMax 小鼠免疫细胞转染试剂盒 (PT06) 。在该实验中,小鼠原代 T 细胞共转染了 Cas9 mRNA、目的基因 sgRNA 和 EGFP-mRNA (其中EGFP mRNA用于目标细胞的筛选) ,成功实现了以下效果:
1、高转染效率:在总细胞中, 79.5% 的细胞实现目的基因敲除 ;而在 EGFP 阳性 T 细胞中, 97% 的细胞实现目的基因敲除 ,基因敲除效果显著。
2、高效共转:可利用筛选标签 (如EGFP、Puro等) 方便地富集成功基因编辑的细胞。
3、低细胞毒性:实验结果显示,转染后的小鼠T细胞生存率高,且生理功能未受影响。
ProteanFect 何以如此高效?
ProteanFect 创新基因递送方式
ProteanFect CRISPRMax 采用了一种创新的生物分子凝聚体技术:ProteanFect 通过将蛋白分子和核酸自组装成一种规则的纳米颗粒,这些纳米颗粒能够通过细胞的主动内吞机制进入细胞内部。这些颗粒稳定而功能强大,可以保护 mRNA 免于降解并保持其活性。此外,这种设计无需额外的化学修饰,从而减少了细胞毒性,显著提升实验的安全性。
图2. ProteanFect蛋白分子与mRNA可在体外自组装形成蛋白纳米颗粒
ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因编辑原理
1、通过共转染 Cas9 mRNA 与 sgRNA,成功表达 Cas9 蛋白。
2、Cas9 蛋白与 sgRNA 在细胞内自组装形成 RNP 复合物。
3、RNP 复合物进入细胞核并实现高效基因编辑。
图3. ProteanFect核酸递送原理示意图
ProteanFect与传统技术的对比
ProteanFect 无需使用病毒载体或电转技术,避免了病毒可能带来的免疫反应和安全风险,也避免了电转对细胞的损伤。ProteanFect 与其他常用转染方法的对比 :
ProteanFect CRISPRMax Cas9 基因编辑卓越优势:
高效性能——转染效率可达 70%-95% ,可同时递送多种核酸,共表达率超 90% , 适用于人源和小鼠原代免疫细胞 ;
卓越安全性—— 非病毒、非电转、非脂质体设计,基于内源蛋白,生物相容性极佳,显著降低细胞损伤;
操作便捷—— 标准化的实验流程,无需复杂的预处理步骤,可重复性高;
系统灵活——不受细胞数量限制,从 103 – 108 个细胞都可以转染。
图4. 使用ProteanFect CRISPRMax Cas9试剂盒在人原代T细胞和小鼠原代T细胞中实现高效基因标记,基因编辑效率范围为 67%-88% 。
ProteanFect 的广泛应用
ProteanFect 不仅在小鼠原代T细胞中表现卓越,还能应用于以下领域:
小鼠原代免疫细胞的基因编辑(NK细胞、γδ T 等免疫细胞),以及人源化小鼠免疫细胞
人原代免疫细胞基因编辑
疾病模型构建
高通量的靶点筛选
图5. 用户对于ProteanFect的认可
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