赛科成科技：基于摆床反应器扩增CAR-T细胞|t细胞|扩增|细胞|肿瘤细胞|赛科成

武汉赛科成科技以细胞培养技术为核心，致力于为全球提供一次性产品，生物反应器，配液储液系统及相关的技术服务，与您11月2-3日相约成都细胞生物产业大会！

嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T cell，CAR-T）免疫疗法是将患者或异体供者体内分离的T细胞通过基因工程技术进行改造，使其表达嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR），从而特异性识别并杀伤肿瘤细胞的一种过继细胞疗法。CAR-T是近年来癌症免疫治疗领域的重大突破之一，在血液系统恶性肿瘤的治疗中体现了巨大优势，具有广阔的发展前景。

CAR-T免疫疗法在血液系统恶性肿瘤治疗中取得了突破性进展。目前美国食品药品管理局（Food and Drug Administration，FDA）共批准了四款靶向CD19的CAR-T细胞产品，这些产品主要用于治疗儿童和青年复发/难治性急性B细胞淋巴细胞白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia，B-ALL）和成人特定类型的B细胞非霍奇金淋巴瘤（B cell non-Hodgkin lymphoma，B-NHL）。随着大量有关CAR-T临床研究的开展，针对不同靶点的有关CAR-T细胞还有望应用于B-NHL、多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）、慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）、急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）、T细胞淋巴瘤及实体瘤等领域。

CAR-T 细胞免疫疗法流程大致可以分为五步：首先，需要采集患者的外周血并提取免疫 T 细胞；其次，利用基因工程技术给 T 细胞加入一个既能识别肿瘤细胞，又能激活 T 细胞靶向杀死肿瘤细胞的嵌合抗体，使 T 细胞变身为 CAR-T 细胞；再次，将经过基因改造的 T 细胞进行体外培养，使其达到符合治疗要求的细胞数量（一般一个病人需要几十亿，甚至上百亿个 CAR-T 细胞）；第四，对 CAR-T 细胞进行质量检测；最后，把扩增好的高质量 CAR-T 细胞回输到患者体内，靶向杀死癌细胞，同时避免对正常组织的损伤。与用药请外援不同，CAR-T 细胞免疫疗法其实是改善装备武装自己从而使敌人致命的方法。本文中利用武汉赛科成公司的摆床反应器扩增CAR-T细胞。

上图为武汉赛科成公司SKC600系列摆床反应器

实验材料

细胞：T细胞（同源）；

试剂：培养基（Lonza）、IL-2（四环生物）；

耗材：1 L（工作体积）培养袋（由武汉赛科成提供），适量一次性储液袋（由武汉赛科成提供），T25、T75、T150方瓶（细胞扩增）；

设备: SKC600 10L 摆床反应器（由武汉赛科成提供）。

实验步骤

1. 种细胞培养

1.1 细胞培养条件：恒温37℃，CO2浓度 5%，相对饱和湿度95%，细胞培养基pH值7.2-7.4。

1.2 根据细胞计数调密度2×106/ml加入方瓶中培养，混匀放入CO2培养箱培养2小时。

1.3 取出培养瓶，轻摇，使沉降于底部的悬浮细胞浮起，培养瓶倾斜30度角，移液管吸取培养基转入离心管中，少许培养基清洗培养瓶，将悬浮细胞全部收集，混匀计数。

1.4 根据细胞计数调整细胞浓度1.2×106/ml接种培养瓶中，加CD3/CD28磁珠，按细胞与磁珠比例为1:3（加之前磁珠用培养基洗涤3次，去除保存液），加入IL-2（100U/ml），混匀放入CO2培养箱中培养。