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1.实验动物:裸鼠
2.分组:
(1)正常4T1细胞注射裸鼠;
(2)特殊处理4T1(敲除或者过表达某基因/药物处理/低氧胁迫)细胞注射裸鼠
3.接种前器械及物品准备(所有物品消毒备用)
1)1ml一次性注射器
4.固定:一人左手大拇指食指轻轻抓住裸鼠的2个耳朵,右手向后方稍微拉紧尾巴,固定在操作台上。
5.接种: 接种者左手轻轻捻起要接种部位的皮肤,右手持1ml注射器平行于皮肤将针头插入皮下1ml,左右晃动下针头,没有什么阻力且看见针头在皮下移动,说明针头在皮下,此时将肿瘤细胞(1x107/只)注入到皮下,退出针头后用手轻轻按压针眼位置几秒,防止细胞流出。
6.检测:
(1)每3d统计体重和瘤径大小;
(2)30d处死取材,观察肿瘤转移部位;
(3)肿瘤组织WB检测;
(4)肿瘤组织免疫荧光/组化检测;
(5)肿瘤组织HE检测;
(6)肿瘤组织COIP检测;
7.结果展示
(1)肺转移发生:
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(2)瘤径和体重变化趋势
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结论:
A在注射细胞3d就开始皮下有肿瘤形成;
B在21一天左右出现肿瘤转移,转移出现在肺部;
C处理组和对照组相比,体重没有差异,但是肿瘤面积有轻微差异;
(3)WB检测例图
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