蜡样芽孢杆菌MPN法操作步骤演示
具体如下：
一、样品处理
冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2℃～5℃不超过18h解冻，若不能及时检验，应放于-10℃~-20℃保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2℃～5℃冰箱保存，24h内检验。
二、样品制备
称取样品25g，放入盛有225mL的PBS或生理盐水的无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均1min～2min，或放入盛有225mL的PBS或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，吸取25mL 样品至盛有225mL PBS或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀，作为1:10的样品匀液。
三、样品稀释
吸取3.2.2中1:10的样品匀液1mL加到装有9mL PBS或生理盐水的稀释管中，充分混匀制成1:100的样品匀液。跟据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。
四、样品接种
取3个适宜连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），接种于10mL胰酪胨大豆多黏菌素肉汤中，每一稀释度接种3管，每管接种1mL（如果接种量需要超过1mL，则用双料胰酪胨大豆多黏菌素肉汤）。于30°C±1℃培养48h±2h。培养结果如图14所示。
五、培养
用接种环从各管中分别移取1环，划线接种到MYP琼脂平板上，30°C±1°C培养24h±2h。如果菌落不典型，可继续培养24h±2h再观察。
六、确定鉴定
从每个平板选取5个典型菌落（小于5个全选），划线接种于营养琼脂平板做纯培养，30°C±1°C培养24h±2h，进行确证实验，同平板计数法。
七、结果与报告
根据证实为蜡样芽孢杆菌阳性的试管管数，查MPN检索表（见附录B），报告每g（mL）样品中蜡样芽孢杆菌的最可能数，以MPN/g（mL）表示。
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