辣椒酱作为食品或调味剂，在日常生活中很常见，其食用安全性有必要引起重视。色素添加剂是影响辣椒酱质量安全的关键风险因素之一，酸性橙Ⅱ作为非食用型色素在食品中是禁止加入的，但因其色泽鲜艳价格低廉，一些不法商贩会将其掺杂在辣椒中牟利，长期摄入会对健康造成危害。
逗点生物结合自身产品优势，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定辣椒酱中的酸性橙Ⅱ含量的方法，样品在提取后，经Copure® PWAX混合型弱阴离子交换柱净化后，采用高效液相色谱仪结合紫外检测器测定。经验证，加标回收率在94-100%，RSD值小于5%，满足测试要求。
一、样品前处理
1.1样品提取
准确称取辣椒酱2.0g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入20mL乙醇-氨水溶液，超声提取30min，再涡旋提取10min，4℃以下8000r/min离心5min，重复提取一次，合并上清液，70℃氮吹浓缩至5mL左右。用甲酸调节pH至6左右，混匀后待净化。
注：乙醇氨水溶液配制，量取无水乙醇70mL，加入20mL氨水，用水稀释并定容至100mL，混匀。
1.2试样的净化浓缩
分别用6mL甲醇、6mL 2%甲酸水溶液活化Copure®PWAX固相萃取柱(货号：COPWAX6150)，将上述待净化提取液加入固相萃取柱。然后依次用3mL 2%甲酸水溶液、3mL甲醇淋洗小柱，抽干。
加入6mL 10%氨水甲醇，抽干（整个固相萃取过程流速控制在1~2滴/秒）。收集洗脱液于氮吹管中，50℃吹至近干。加超纯水定容至2.0mL，涡旋混匀1min，过0.22μm亲水PTFE滤膜，待HPLC上机检测分析。
1.3空白实验
1.3.1过程空白：取一支洁净的50mL离心管，不称取试样，按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
1.3.2空白本底实验：称取样品2g（精确至0.001g）按照上述1.1和1.2进行提取、净化，浓缩，取续滤液上机测试。
二、标准系列工作液
精密移取适量酸性橙Ⅱ标准使用液，用水配制成0.1、0.2、0.5、1.0、10.0µg/m L的标准工作溶液，以酸性橙Ⅱ含量为横坐标(X, µg/mL)，峰面积为纵坐标Y，制作校准曲线。
三、仪器条件
仪器：ThermoFisher U3000液相色谱仪
色谱柱：Commasil® AQ-C18
(4.6 mm×250 mm，5 μm)
流动相：甲醇：20 mmol/L乙酸铵溶液=（65:35）
洗脱方式：等度洗脱
流速：1 mL/min
柱温：30 ℃
进样量：10 μL
检测器：紫外检测器
检测波长：484 nm
四、实验结果
4.1加标回收
五、注意事项
1）离心时4℃以下，可以更好地抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有助于油脂的凝固，样品更易转移。
2）过柱前注意样液的pH值，调节pH至6左右，能够有效保证上样时目标化合物和PWAX填料的结合。
3）上机前过滤所用的滤膜要用亲水PTFE。
六、订购信息
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