一、支原体污染：细胞培养的潜在威胁
细胞培养中支原体污染是一个极为普遍的问题。据相关文献报道，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为 30 - 60%，而中国大陆地区的支原体污染比例与此相当甚至更严重。支原体污染会对细胞产生多方面的危害。
在细胞生长方面，支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至停止。同时，会导致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。有研究显示，传代次数越多的细胞，污染支原体的可能性就越大，污染率高达 57% - 92%。
对细胞代谢而言，培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA 的合成障碍。支原体活动还使培液成分发生改变，如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质，影响细胞代谢。此外，支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；消耗细胞的核苷库，引起细胞染色体异常。
支原体污染还会影响免疫细胞产量。对于巨噬细胞的培养体系，支原体会抑制干扰素的合成和降低其活性，加大继发感染其他细菌和病毒的几率。也有研究表明，支原体可以通过植物血凝素，干扰淋巴细胞的刺激和分化。
二、应对支原体污染的方法
（一）预防措施
1. 原材料控制
鸡胚、细胞、胰酶、血清等动物源性原材料是生物制品的重要生产材料，也是支原体赖以生存的基质。已有调查及研究显示，世界范围内正在使用的细胞体系中支原体污染发生率达到 30％～60％。因此，在保证这些原材料无菌的同时，使用前加强检验可有效阻止支原体污染。例如，可以对原材料进行支原体专项检测，确保其符合无菌要求。
2. 环境控制
生产车间应定期清洁和消毒，并定期检测，保证环境参数均在可控范围内。生产流程中各个环节要细化，注重人、物、产品以及污物的进出路径，避免交叉污染。生产设备的消毒要彻底，根据生产用具和器械的特性进行相应的高压灭菌或消毒水浸泡，以确保消毒彻底。进入车间洁净区的所有物品均应经表面消毒或紫外照射后方可进入。据相关资料显示，定期清洁和消毒生产车间能有效降低支原体污染的风险，将污染发生率控制在一定范围内。
3. 良好实验室规范
加强对所有人员的生产流程和操作流程的培训至关重要。进无菌室前严格按照 GMP 要求用肥皂洗手，按规定穿无菌服。工作开始要先用 75％酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。操作者动作要轻，尽量减少走动。通过规范操作，可以大大减少因人为因素导致的支原体污染。
4. 消毒灭菌环节
通过消毒灭菌可防止各种污染物和微生物的滋生。要对生物制品生产过程中所用到的各种器具和物品进行消毒灭菌，通过无菌测试后方可使用，从源头上控制污染物的出现。例如，可以采用高压蒸汽湿热消毒、干热消毒、滤过消毒等方法对不同的器具和物品进行消毒。
5. 合理利用抗生素
抗生素对支原体污染具有一定的抑制作用，所以在生物制品生产过程中应合理利用以预防支原体污染现象的发生。但是支原体对一般抗生素不敏感，并具有一定的抗药性，所以应选择有效的抗生素，在控制好使用剂量的前提下，尽量做到既不影响细胞的正常功能，又能较好地控制支原体污染。
（二）污染后处理
1. 试剂盒和抗生素方法祛除细胞培养产物中的支原体污染
发生支原体污染后，可以采用试剂盒和抗生素方法对细胞培养产物进行祛除。
2. 采用汽化过氧化氢消毒法对洁净室进行彻底消毒
目前比较合适的方法是采用 35% 过氧化氢消毒液的汽化过氧化氢消毒法。该方法是一种广谱灭菌方法，对支原体、病毒、各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有良好杀灭作用，对实验室设备安全，消毒完成后产物为水和氧气，不会形成二次残留污染。例如，在细胞培养实验室中，当环境发生支原体污染后，须对洁净室进行彻底消毒，包括生物安全柜、空调系统、高效过滤器、培养箱消毒等都可以采用这种方法。
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