样本采集过程要规范，以确保样本质量。对于血液样本，要使用合适的采血器具和抗凝剂（如果需要抗凝），避免溶血和凝血。组织样本采集后应尽快处理，防止组织降解。
样本如果不能立即检测，要根据样本类型选择合适的保存条件。血清和血浆样本一般可在 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融，因为这可能会破坏抗体结构，影响检测结果。
样本预处理有些样本可能需要进行预处理，如离心、过滤或稀释等。离心转速和时间要按照试剂盒说明书要求设置，以有效分离血清或血浆等。如果需要稀释样本，要使用试剂盒推荐的稀释液，并准确控制稀释倍数，确保样本中的抗体浓度在试剂盒的检测范围内。
实验操作过程注意事项
试剂准备与保存试剂盒从冰箱取出后，应让试剂在室温下平衡一段时间（通常 15 - 30 分钟）后再使用，防止试剂温度过低影响反应活性。
试剂使用前要检查是否在有效期内，外观是否正常。例如，查看酶标抗体有无沉淀、变色，底物溶液是否澄清等。使用过程中，未用完的试剂应按照说明书要求的条件及时保存，特别是对温度敏感的试剂（如酶标抗体）要尽快放回冰箱冷藏。
加样操作加样时要使用经过校准的移液器，确保加样体积准确。避免加样过多或过少，这可能会导致实验结果偏差。加样过程中要防止产生气泡，因为气泡会影响试剂与样本的混合和反应。如果产生气泡，应轻轻敲击微孔板边缘使气泡排出。
孵育条件控制孵育是关键步骤，要严格按照试剂盒说明书规定的温度和时间进行。一般孵育在恒温箱或水浴锅中进行，温度波动应控制在较小范围内，例如 ±1℃。孵育时间过长或过短都可能影响抗原 - 抗体结合效率，从而影响检测结果。
洗涤步骤洗涤的目的是去除未结合的物质，要严格按照说明书要求的洗涤次数和洗涤液用量进行操作。洗涤不充分会导致背景噪音增加，洗涤过度可能会破坏已形成的抗原 - 抗体复合物。洗涤过程中可以使用自动洗板机或手工洗涤，手工洗涤时要确保洗涤液充分覆盖微孔板每个孔，并且倾倒洗涤液时要彻底。
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