疏水层析填料选择指南|填料|层析|疏水层|疏水性|蛋白

疏水层析是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质或多肽等生物大分子的一种方法，其最大的优点在于与蛋白质的作用温和，能最大程度地保持生物大分子的天然结构与生物活性。高盐上样低盐洗脱的吸附分离模式及层析原理使得疏水层析成为理想的互补纯化方式，也可作为操作单元之间的调节技术，适用于疏水性强、高耐盐蛋白的分离，是纯化抗体、疫苗、重组蛋白、干扰素、激素等大分子的有效手段，尤其在去除聚体方面有良好表现。

疏水层析介质的填料选择

·基架与粒径

疏水填料与离子填料类似，由基架与疏水配基交联而成，博格隆可提供四种基架类型的HIC产品：Bestarose FF(快流速琼脂糖基架，90 μm)、Bestarose HP(高分辨率琼脂糖基架，34 μm)、Diamond(高刚性琼脂糖基架，90 μm)及Diamond Mustang(高分辨率刚性琼脂糖基架，40 μm)，这四种基质均为琼脂糖，保留了天然多糖的亲水性及孔结构，其中Diamond与DiamondMustang为高刚性琼脂糖，具有更佳的物理化学稳定性。填料的粒径小分辨率高，粒径大流速快，可应用于捕获、中度纯化、精细纯化等蛋白纯化的各个阶段。

·疏水性强弱

选择疏水作用层析的关键在于选择合适的疏水强弱的配基，若蛋白质的疏水性较强就需要选择较弱的疏水介质，反之亦然。不同配基及配基浓度介质其疏水作用力不同，常见疏水作用层析配基的疏水性强弱顺序如下：Butyl-S < Butyl < Octyl < Phenyl。苯基疏水性最强，根据配基取代程度不同分为高取代（High Sub，HS）和低取代（Low Sub，LS）；Octyl和Butyl属于脂肪族疏水配基，辛基链比丁基链长而更具疏水性；Butyl-S 是疏水性最弱的疏水填料，适合在较低盐浓度条件下纯化强疏水性分子。可先选用疏水性最强的填料进行条件摸索，在确保疏水层析对目的分子的分离是适用的后，为改善分离效果再选择其他填料。