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全网最强合集《斑马鱼行为实验手册》,脑声小店首发预售

斑马鱼是一种与人类同源性较高的脊椎动物,具有容易获得、生长快速、给药方便、胚胎透明等特性,在构建中枢神经系统 疾病模型方面具有重要的效用,是研究中枢神经系统疾病和药物研发的重要工具。通过建立斑马鱼外周运动神经元损伤模型,可观察药物的干预作用。通过观察神经元损伤后的再生过程,了解神经再生的机制。评估潜在药物对神经损伤修复的促进作用。

野生型AB系斑马鱼,受精后1天(1dpf),运动神经元转基因荧光斑马鱼,1dpf,饲养于 28℃的养鱼用水中(水质: 每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐,电导率为480 ~510μs/cm; pH 值为 6.9 ~7. 2; 硬度为53.7 ~71.6mg/L CaCO3)。

取1dpf运动神经元转基因荧光斑马鱼,实验分为空白对照组、模型组、阳性对照组和给药组,每组30尾。除空白对照组外,其余各组斑马鱼用1.5%酒精诱导处理斑马鱼48h,建立斑马鱼外周运动神经元损伤模型。药物处理结束后,按简单随机抽样法每组随机挑选10尾斑马鱼,在荧光显微镜下拍照,利用图像处理软件进行图像分析,定量外周运动神经元的长度(L),计算促神经再生率,计算公式如下: 促神经再生率(%) = L(药物组)-L(模型组) L(空白组)-L(模型组) ×100%。

行为分析:

  • 运动轨迹:分析斑马鱼的运动轨迹,计算游动速度和方向。观察斑马鱼幼鱼的形态学变化。

  • 触碰反应:记录斑马鱼幼鱼在触碰刺激下的游泳次数。

  • 运动频率:记录斑马鱼的运动频率,比较损伤组和对照组的差异。

荧光图像分析:

  • 神经元形态:分析荧光图像,评估神经元的形态和完整性。与空白对照组比较,模型组斑马鱼外周运动神经元长度显著缩短。

  • 损伤程度:量化受损神经元的数量和损伤程度。

形态学变形:

EtOH处理的斑马鱼幼鱼表现出明显的形态学变形。

相比于未处理的斑马鱼,EtOH处理的斑马鱼在触碰刺激下的游泳次数显著减少。

运动神经元轴突缺陷:

免疫标记结果显示,2.5% EtOH处理的斑马鱼幼鱼的运动神经元轴突缺陷率显著高于对照组。EtOH处理的斑马鱼幼鱼的运动神经元轴突缺陷率显著高于对照组。

EtOH处理的斑马鱼幼鱼的红肌纤维和白肌纤维小于对照组。

参考文献:

  • 钟小清,朱晓宇,徐懿乔,等.脑脉泰胶囊对外周神经元损伤模型斑马鱼神经再生的影响[J].中医杂志,2021,62(11):990-993.

  • SYLVAIN NJ,BREWSTER DL,ALI DW.Zebrafish embryos exposed to alcohol undergo abnormal development of motor neurons and muscle fibers[J]. Neurotoxicol Teratol,2010, 32( 4) : 472-480.

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