培养基的性能测试方法

微生物检验中，几乎每个实验都要使用到培养基。培养基，就像大海中的灯塔、黑暗屋子中的手电筒、观察天体的天文望远镜，使得小小的菌种形态肉眼可见。

选择高品质的培养基，对于细胞培养而言，不仅可以确保您实验数据的稳定性和可重复性，更能节约宝贵的实验时间和精力。选择培养基时还需关注它的性能测试方法，本篇将从以下几种类别进行介绍：

一、非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法

平板的制备与保存：

倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少3mm厚的琼脂层（直径90mm的平皿通常要加入18mL～20mL琼脂培养基），需添加试剂的培养基，应使培养基冷却至47℃～50℃后才添加试剂。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或) 2℃～8℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应对琼脂表面进行干燥，但应注意不要过度干燥。

工作菌悬液的制备：

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。

接种：

用1μl接种环按图1划线平板。A区用接种环按0.5 cm的间隔划4条平行线，按同样的方法在B区和C区划线，最后在D区内划一条连续的曲线。同时接种两个平板，划线时可在培养基下面放一个模板图，并按标准规定的培养条件培养平板。

注意事项：

操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°～30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。

计算：

培养后，评价菌落的形状、大小和生长密度，并计算生长指数G。

每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1，每个培养皿上G最大为16。如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。记录每个平板的得分总和便得到G。如，菌落在A区和B区全部生长，而在C区有一半线生长，则G为10。

结果解释：

目标菌在培养基上应呈现典型的生长。目标菌的生长指数G大于6时，培养基可以接受。非选择培养基的G值通常较高。

二、选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法

目标菌半定量测试方法

同非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法

非目标菌(选择性) 半定量测试方法

平板的制备与保存：

倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少3mm厚的琼脂层（直径90mm的平皿通常要加入18mL～20mL琼脂培养基），需添加试剂的培养基，应使培养基冷却至47℃～50℃后才添加试剂。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或) 2℃～8℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应对琼脂表面进行干燥，但应注意不要过度干燥。

工作菌悬液的制备：

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。

接种：

用1 μL接种环取选择性测试工作菌悬液1环，在待测培养基表面划六条平行直线（如图1），同时接种两个平板，划线时可在培养基下面放一个模板图，按标准规定的培养条件培养平板。

注意事项：

操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°～30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。

计算：

培养后按以下方法对培养基计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1，每个培养皿上最多为6分。如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。记录每个平板的得分总和便得到G。同时接种两个平板。

结果解释：

非目标菌的生长指数G一般小于或等于1，至少应达到小于5。

三、非选择性增菌培养基、选择性增菌培养基和选择性液体计数培养基的定性测试方法 同非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法

培养基的制备：

将培养基分装试管，每管10mL。

工作菌悬液的制备：

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜，进行10倍系列稀释至10-3，或采用其它方法,制备成105 CFU/mL～107 CFU/mL的菌悬液作为工作菌悬液。

接种：

用1μl接种环取一环工作菌悬液直接接种到用于性能测试的液体培养基中，按适合的培养时间和温度进行培养。

结果解释：

用目测的浊度值)评估培养基。

0表示无混浊；

1表示很轻微的混浊；

2表示严重的混浊。

目标菌的浊度值应为2，非目标菌的浊度值应为0或1。

有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心震荡试管后再进行观察。选择性液体计数培养基目标菌应有产气现象，非目标菌无产气现象。

四、悬浮培养基和运输培养基-定性测试法

培养基的制备：

将培养基分装试管，每管10 mL（有特殊要求的可选用5 mL ）。

工作菌悬液的制备：

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜。

接种：

用1μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到装有待测培养基的试管中,混匀后，立即用10μL接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养；

剩余已接种菌液的待测培养基置20 ℃～25 ℃放置45 min后，再用10μL接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养。

如保存条件有特殊要求的待测培养基，参照附录G要求放置或培养后再进行划线接种

结果观察与解释：

接种前后平板上目标菌的生长情况应均为良好。