LNPs通常由四种成分组成:磷脂、胆固醇、“隐形”脂质和可电离脂质。“隐形”脂质常用PEG分子,虽然PEG常被认为是非免疫原性的,但抗PEG抗体已经被检测出来,它的出现会加速LNPs的血液清除并激活经典的补体途径,因此,PEG脂质的占比不能太高;可电离脂质在生理PH值下的中性,则有效避免了阳离子脂质引起的直接炎症毒性。

图1. mRNA-LNPs的生成及检测
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图1. mRNA-LNPs的生成及检测

mRNA溶解于PH 4.0的柠檬酸钠(浓度不高于0.1M)缓冲液,四脂质成分溶解于无水乙醇中,两相即可按特定的比例在微流控设备上进行快速合成。mRNA-LNPs的大小和均匀性可通过动态光散射来验证,表面电荷通过ζ电位测量来确定,酶标仪可用来测定样品的包封率,RNA凝胶则可验证有效载荷的纯度及稳定性(图1)。