引言:

本研究关注的是贝勒森芽孢杆菌ZF2,一种具有保护植物免受病原侵害潜力的菌株,通过分离健康黄瓜植物茎中的菌株ZF2,并对其进行全基因组序列分析,科研人员发现该菌株对多种植物细菌和真菌病原体,包括黄瓜叶斑病真菌,具有广泛的拮抗活性。

研究人员还发现了参与细菌定植的多个基因,包括与运动性、生物膜形成、鞭毛生物合成和包膜生物合成相关的基因,这些研究结果对今后研究,贝勒森芽孢杆菌ZF2的生物防治机制具有重要意义,并有助于该菌株在蔬菜病害防治中的应用。

贝氏芽孢杆菌的生物防治机制

贝氏芽孢杆菌(B. velezensis)是一种革兰氏阳性、杆状、运动、孢子形成和需氧细菌,在琼脂固化培养基上形成乳白色、粗糙的菌落,边缘略有不规则,根据DNA-DNA相关性值被科学家定义为为B. amyloliquefaciens的异型同义词。

贝氏芽孢杆菌根据核心基因组序列与B. amyloliquefaciens区分开来,在最近的一项研究中,这两个物种与“原始芽孢杆菌成员”枯草芽孢杆菌分开,迄今为止,许多研究已经调查了贝氏芽孢杆菌控制植物病害的潜力。

据报道,从樟脑中分离出的贝氏芽孢杆菌CC09,可作为控制小麦白粉病的生物防治剂,贝氏芽孢杆菌2A-2B从空气孢子虫的根际分离出来,已被证明对根腐病表现出很强的抑制作用。

科学家已经探索了贝氏芽孢杆菌LDO2(一种花生内生菌)、贝氏芽孢杆菌BAC03(从马铃薯普通黑星病抑制土壤中分离出来)和贝氏双歧杆菌RC 218(从小麦花药中分离)用于多种植物病害的生物防治。

黄瓜由黄瓜叶斑病真菌(C. cassiccola)引起的黄瓜叶斑病是黄瓜最重要的叶面病害之一,黄瓜叶斑病真菌是一种主要的植物真菌病原体,对包括黄瓜在内的许多植物物种造成重大经济损失,目前,化学防治是防治棒状孢子虫叶斑病的主要方法,但黄瓜叶斑病真菌对许多常用的杀菌剂产生了抗性,包括苯并咪唑、二羧亚胺和 N-苯基氨基甲酸酯。

所以科研人员开始探索生物防治,作为预防和抑制植物病害的替代解决方案,巨型黄曲霉可以控制花生仁上的黄曲霉,B.戊基葡聚糖L-1可用于控制梨环腐病,枯草芽孢杆菌BSCBE4,绿假单胞菌PA23和荧光假单胞菌ENPF1,在体外抑黄瓜叶斑病真菌的生长。

可惜的是,探索贝氏芽孢杆菌,对棒状孢子虫叶斑病的生物防治潜力的研究较少,贝氏芽孢杆菌对该病的生物防治机制仍有待阐明。

许多芽孢杆菌菌株已用于生物防治策略,作为植物病原体和/或植物生长促进剂的拮抗剂,这些主要依赖于各种次级代谢物的产生,包括脂肽、多肽、巨内酯、脂肪酸、聚酮和异香豆素,其中大多数表现出广泛的抗菌活性。

这些结构多样化的化合物,也可以影响根际的微生物群落或触发宿主防御反应,贝氏芽孢杆菌含有大量次级代谢物生物合成的基因簇,如基因簇srf,bmy和fen,被证明可以指导环状脂肽表面活性素,杆菌霉素和fengycin的合成。

基因簇MLN,BAE和DFN分别与聚酮酸宏乳素,杆菌烯和艰难杀虫素的合成有关,这些次生代谢物中的大多数有助于贝氏芽孢杆菌菌株,在根际土壤中的定植,贝氏芽孢杆菌 FZB42T显示出较强的定植能力和抗菌活性,其中一个主要因素是由于产生多种脂肽,包括表面活性蛋白、伊图林、杆菌霉素、凤青、支孢杆菌素、杆菌素。

贝勒森双歧杆菌QST713抗绿霉病的拮抗剂,含有15个用于合成次生代谢物的基因簇,所有这些基因簇都显示出抗菌或抗菌活性,贝勒森双歧杆菌从棉花废料中分离出的M75,具有许多与合成具有抗菌活性,或抑制植物病原体的各种次生代谢物相关的基因。

从贝氏芽孢杆菌 G341中分离出的两种抗真菌化合物,已被鉴定为杆菌霉素,也被观察到抑制各种植物病原真菌的菌丝体生长,重要的是,定植和生物膜形成与芽孢杆菌属的生物控制密切相关。

基于以前的研究,许多与生物膜形成和定植相关的基因,已被证明在生物控制中发挥重要作用,包括鞭毛运动相关基因motA,motB和flgM和芽孢杆菌特异性生物膜形成途径基因kinB,spo0A,spo0F,degU和degS。

除了这些活动外,科研人员还报告了使用促进生长的物质,包括生长素、细胞分裂素和赤霉素促进植物生长,贝氏芽孢杆菌FZB42T可以产生吲哚-3-乙酸(IAA)和细胞分裂素,这两者都与植物生长促进有关。

本研究从健康黄瓜茎中,分离出对多种植物细菌和真菌病原体,具有拮抗活性的贝氏芽孢杆菌菌株ZF2,对ZF2的全基因组进行测序、注释,并与其他芽孢杆菌物种的代表性基因组进行比较,通过系统发育分析,确定ZF2的分类位置,及其与其他代表性芽孢杆菌属的关系。

基因组比较显示,参与次级代谢物生物合成的各种基因,以及与有益植物-细菌相互作用相关的功能基因,发生在ZF2基因组中,这些结果为贝氏芽孢杆菌的生物防治机制,提供了新的见解,有利于菌株ZF2,在植物病害生物防治中的实际应用。

挖掘与植物-细菌相互作用的功能基因

芽孢杆菌菌株最近被广泛用作生物防治剂,因为它们具有很强的耐受不利环境条件的能力,如高温、高压和盐度,并促进有益的植物-细菌相互作用,这些特性主要归因于与生物防治相关的各种功能基因,包括负责孢子形成,生物膜形成,细菌定植,鞭毛生物合成,植物生长促进和植物防御诱导的基因。

正如预期的那样,贝氏芽孢杆菌ZF2基因组,包含大量编码这些生物学功能的基因,具体而言,ZF2基因组中发生了不同的孢子形成基因,同源 Spo0A(AXY70842.1)作为枯草芽孢杆菌孢子形成的主要转录调节因子,SinR(AXY70880.1)及SinI(AXY70879.1)被鉴定为多效性DNA结合蛋白,对于孢子形成和枯草杆菌蛋白酶合成至关重要。

YqxM-SipW-TasA(AXY70883.1)操纵子编码TasA蛋白,该蛋白在生物膜中将细胞结合在一起,并与孢子形成有关,科研人员在ZF2基因组中,检测到许多与生物膜形成相关的调控基因,例如sigEFGH(编码RNA聚合酶孢子形成sigma因子),pgsABC(参与聚γ-谷氨酸合成)和escABC(编码转运蛋白渗透酶)。

为了成为有效的生物防治剂,B. velezensis菌株,是植物组织中运动和定植所必需的,有趣的是,我们的结果表明,ZF2具有swrABC基因,编码群体运动蛋白,与荚膜生物合成相关的胞外多糖操纵子,以及许多参与鞭毛生物合成的FLI和flg基因。

所有这些功能都被认为可以增强群体运动和定植,这些基因在ZF2和FZB42中高度相似,氨基酸鉴定率为97-100%,在枯草芽孢杆菌中未发现ZF168的许多功能基因T,或者相似度较低,原因可能是两种菌株属于不同的物种。

科研人员还发现,在ZF2基因组中,检测到多种编码与植物生长促进相关的蛋白质的基因,包括推定的吲哚-3-乙醛(IAA)、脱氢酶(dhaS),IAA乙酰转移酶(ysnE),生长素外排载体(ywkB),植酸酶和腈化酶(yhcX),这些基因负责IAA的产生,IAA被认为有助于芽孢杆菌菌株的植物生长促进能力。

菌株ZF2还具有编码参与3-羟基-2-丁酮合成的蛋白质的各种基因,包括乙酰乳酸脱羧酶(alsD),乙酰乳酸合酶(alsS),转录调节因子(alsR)和2,3-丁二醇脱氢酶(bdhA),并且在ZF2和FZB42中显示出高度相似性T(95-100%氨基酸同一性)。

据科研人员反馈,该化合物可改善植物生长并引发全身抗性,ZF2还含有许多与纤维素酶和蛋白酶生物合成相关的基因,包括编码丝氨酸蛋白酶(spr,ispA,aprX,yyjD和yyxA),葡聚糖酶(bglC和bglS),半乳糖激酶(galK,galE和galT),磷酸转移酶(lacE和lacF)和许多膜内蛋白酶(ydcA,ydiL)的基因。

这些基因在ZF2和FZB42中表现出高度的相似性,T(96 至 100% 氨基酸同一性),这些酶被认为与植物中芽孢杆菌的碳源,和纤维素利用有关,总而言之,这些发现表明贝氏芽孢杆菌(B. velezensis ZF2)适应了不同的环境,并具有促进植物生长的潜力。

结论:

在经过复杂的研究以后,科研人员终于确定,用贝氏芽孢杆菌开发生物防治剂,能很好地保护黄瓜免受棒状孢子虫叶斑病侵害,贝氏芽孢杆菌是从健康黄瓜植株茎中分离出的,对14种植物细菌和真菌病原菌具有广泛的拮抗活性,可用于黄瓜棒状孢子虫叶斑病的生物防治。

科研人员进行的全基因组测序,和比较基因组分析,也证实了菌株ZF2作为贝氏芽孢杆菌成员的分类学分类,ZF2基因组中还存在多个,与细菌定植和植物生长促进有关的基因,这些基因与贝氏芽孢杆菌 FZB42高度相似,这些特征表明,菌株ZF2可作为一种生物防治剂用于植物病害防治,并有助于深入了解贝勒森双歧杆菌的生物防治机制。

参考文献:

阿卜杜拉齐兹,乔莱特,《抗真菌芽孢杆菌菌株中的脂肽生物多样性》

阿尔瓦雷斯,卡斯特罗,《植物生长促进细菌解淀粉芽孢杆菌》

博里奥利,菲舍尔,《枯草芽孢杆菌作为生物防治剂》