两天5篇《Nature》！Incucyte杀疯了……|Nature|免疫|巨噬细胞|细胞系|蛋白|角质

长时程活细胞成像系统Incucyte®因其简便的实验设置和分析流程、以及广泛的应用方向，深受用户喜爱。在体外细胞水平的实验中发挥着重要作用。引用其数据的CNS正刊上论文数量众多，目前使用到Incucyte®发表的CNS正刊总数已经达到约200篇，往期链接如下：

最近的2024年10月，利用Incucyte® 发CNS正刊的数量又达到了新高度，两天5篇NATURE!

他们又是如何应用Incucyte® 的呢？

NATURE

免疫细胞和靶细胞共培养[1]

中毒性表皮坏死松解症（TEN）是一种由常见药物诱导的致命皮肤反应，已成为一个新兴的公共卫生问题。TEN患者会因角质形成细胞死亡，而出现严重和突然的表皮脱离。通过蛋白质组学分析，发现TEN患者免疫细胞和角质形成细胞区室中I型和II型干扰素的显著富集。Incucyte® 体外实验发现，使用JAK抑制剂托法替尼（ tofacitinib）降低了角质形成细胞的细胞毒性。体内口服给药改善了两种不同的TEN小鼠模型的临床和组织学疾病严重程度。

图1. Incucyte® 测试：自体共培养模型中，活化的外周血单核细胞（PBMC）在5小时内有效杀死角质形成细胞，并且这种作用被托法替尼以剂量依赖性方式抑制。每隔两个小时测试一次，对死亡的角质形成细胞进行统计。

Incucyte® 有多个板位，可以满足多个实验组的高通量测定。

NATURE

细胞凋亡[2]

三阴性乳腺癌（TNBC）因其高度侵袭性和高复发率而令人谈虎色变，迫切需要开发更有效的治疗方法。本文发现，AKT抑制剂与组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂的药物具有协同作用，并在体内多个TNBC模型中促进持续的肿瘤消退，明确了其药理作用。Incucyte® 被用于体外检测药物对肿瘤细胞系的杀伤作用。

图2. Incucyte® 测试结果：NucLight Rapid Red试剂（Sartorius，4717）标记细胞，用Cytotox Green （Sartorius，4633）监测细胞毒性。每2小时采集一次图像，持续5天。使用Incucyte®软件通过量化overlay的NucLight-red和Cytotox-green双阳性细胞数（即死亡的细胞数）除以 NucLight-red 阳性细胞的总数来确定细胞毒性细胞的百分比。

Incucyte®有完善的活细胞试剂，并提供相应的protocol，以及overlay分析等软件功能。

NATURE

划痕实验[3]

人类产前皮肤由先天免疫细胞（包括巨噬细胞）组成，但这些细胞是否仅在免疫方面发挥作用，还是在形态发生中具有其他功能，尚不清楚。本文汇编了一份全面的产前人类皮肤多组学参考图谱，结合单细胞和空间转录组学数据，表征了皮肤的微解剖组织生态位。该图谱揭示了非免疫细胞和免疫细胞之间的串扰是毛囊形成的基础，与无疤痕伤口愈合有关，对皮肤血管生成至关重要。

图3. Incucyte® 划痕测试：成纤维细胞与巨噬细胞共培养可以增加伤口愈合。

Incucyte® 有专门的工具可以方便的创造一致的划痕。

NATURE

两种细胞的竞争[4]

晚期尿路上皮癌（UC）是一种经常致命的疾病，具有显著的遗传异质性。化疗会诱导数百个晚期亚克隆突变的爆发。通过基因组计算工具观察到，形成染色体外DNA （ecDNA）的SV（复杂结构变异）具有频繁的高拷贝数环状扩增子特征，例如尿路上皮癌中的大多数 CCND1（G1/S-特异性周期蛋白-D1基因），并包含额外的DNA片段并导致治疗耐药性的进化。在竞争试验中，在顺铂或载体对照存在下，共培养等数量的具有GFP标记的空载体和mCherry标记的CCDN1游离型ecDNA的UMUC1细胞（CCDN1 UMUC1），使用Incucyte®活细胞成像系统测量 mCherry/GFP荧光信号的比率来监测对化疗的适应性。