温度是影响体外血脑屏障（BBB）模型药物渗透性评估的关键环境参数。研究表明，培养温度的变化会通过多重机制改变BBB的穿透特性：

在标准实验条件（37℃）下，脑内皮细胞维持正常的紧密连接结构和代谢活性，此时测得的药物渗透性最能反映生理状态。当温度降至4℃时，细胞膜流动性降低约60%，同时ATP合成效率下降超过90%，这会导致以下变化：1）载体介导转运（如GLUT1转运葡萄糖）几乎完全抑制；2）主动外排（P-gp功能）减弱约70%；3）细胞间紧密连接孔径收缩15-20%。

典型数据表明，普萘洛尔等脂溶性小分子在4℃时的表观渗透系数（Papp）比37℃降低2-3倍，而蔗糖等旁细胞标记物的渗透性仅下降10-15%，提示温度主要影响跨细胞途径。值得注意的是，某些细胞穿透肽（如TAT）在4℃仍保持50%以上的穿透效率，暗示其可能存在非经典转运机制。

为规范实验操作，建议：

1）全程维持37±0.5℃恒温环境（使用温控培养箱）

2）预平衡培养基至实验温度（避免瞬时热冲击）

3）低温处理不超过4小时（防止不可逆损伤）

这些温度效应研究为优化体外BBB模型的标准化操作提供了重要依据，特别在评估温度敏感型药物递送系统时尤为关键。

北京爱思益普生物科技股份有限公司拥有完整的服务链，从转铁蛋白受体的优化选择到CNS-PK 动物技术一系列平台。

体外BBB模型中的通透性（转胞吞作用）检测平台：

我们用hCMEC/D3， bEnd.3 和U251构建了一系列的体外血脑屏障模型用于检测抗体透过血脑屏障的通透性。

Transwell-BBB模型列表

Ø hCMEC/D3和bEnd.3单细胞模型

Ø hCMEC/D3和U251细胞的共培养模型

Ø bEnd.3和U251细胞的共培养模型