细胞复苏培养
常见问答汇总
Q 细胞冻存放置于负 80 度冰箱一般能够保存多久?
冻存前细胞较好，冻存时操作无误及试剂是新鲜的，则在 -80℃ 冰箱冻存的细胞一般半年左右复苏培养时完全没有问题；但若是长期不做，或阶段性实验完成，可将细胞转入液氮冻存，保证下次使用时细胞是可用的。
Q 如何防止细胞污染？
首先，全程注意无菌操作；
其次，所用器材高压灭菌，试剂若不是无菌则需要 0.22 μm 水系或有机系过滤器进行灭菌；
最后，可在培养基中加入 1% 的双抗，防止污染。
流式细胞术
常见问答汇总
Q 流式细胞学检测时，为什么有很多碎片？
原因可能有 5 个：
❶ 固定时间太长会让细胞碎片增多；
❷ 重悬细胞不建议用旋涡震荡，可使用吸头吹吸，注意不要吹起气泡；
❸ 消化过度，可适当降低浓度或减少用量来降低胰蛋白酶消化对细胞的损伤；
❹ 传代后次日细胞换液，先用缓冲液漂洗两次以洗去未贴壁的细胞及细胞碎片，再加入新的培养液继续培养；
❺ 最 后 ，确保细胞是新鲜收集的，否则容易出现大量死细胞和碎片。
细胞免疫荧光
常见问答汇总
免疫荧光主要判断目的蛋白的定位，实验过程中会染表征细胞核的 DAPI。拿到免疫荧光结果，使用 PS 等软件进行 merge，如果染色结果只在 DAPI（蓝色）周围有一圈，即细胞膜定位；如果染色结果显示 DAPI 周围到处都有，即胞浆定位；如果染色结果和 DAPI 完全 merge，即细胞核定位。
接下来，定量化细胞骨架。点击 Image → Type → 8-bit 可以二值化图像转换成黑白，分析骨架 Analyze → Skeleton → Analyze Skeleton (2D/3D)。
最后进行面积测定。图像转为 8-bit 后，调整阈值，框选细胞及核，Analyze → Set Measurements，可以 Measure 细胞整体面积或单个面积。
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