前言

近年来，嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法在血液系统恶性肿瘤中取得了突破性进展，为患者带来了显著的临床获益。然而，CAR-T在实体瘤治疗中的应用仍面临诸多挑战，包括肿瘤微环境的免疫抑制、靶抗原的异质性表达以及CAR-T细胞的持久性和浸润性不足等问题。尽管如此，随着对肿瘤生物学和免疫机制的深入理解，以及CAR-T技术的不断优化，针对实体瘤的CAR-T疗法正在逐步展现出潜力。在2025年美国癌症研究协会（AACR）年会上，多项关于CAR-T治疗实体瘤的研究成果被公布，涵盖了从靶点筛选、细胞工程化改造到临床疗效评估的多个方面。这些研究不仅为克服实体瘤治疗中的瓶颈提供了新的思路，也为未来CAR-T疗法的进一步开发和应用奠定了重要基础。本文旨在整理AACR会议上CAR-T治疗实体瘤的最新研究进展，以期为相关领域的研究者和临床医生提供参考和启发。

使用产气荚膜梭菌肠毒素C末端靶向Claudin-3的CAR-T细胞治疗TKI耐药的EGFR突变NSCLC

EGFR-TKIs的获得性耐药仍然是非小细胞肺癌（NSCLC）治疗的重大挑战。Claudin-3（CLDN3）是一种参与维持上皮完整性的紧密连接蛋白，研究表明其通过EGFR下游通路过表达或在NSCLC中发生错位分布，从而促进肿瘤的恶性潜能，使其成为潜在的治疗靶点。产气荚膜梭菌肠毒素（CPE）的受体结合C端结构域（cCPE）能够特异性靶向CLDN3。本研究旨在开发一种利用 cCPE 靶向 CLDN3 的新型 CAR-T 疗法，以克服TKI治疗后NSCLC的耐药性。

通过单细胞RNA测序（scRNA-seq）评估了95例患者原发肺组织中CLDN3的表达，包括EGFR野生型（WT，n=35）、未经治疗的EGFR突变型（MT，n=55）、EGFR-TKI治疗后（n=5）以及正常组织（n=22）。使用ATCC和患者来源的细胞系（PDCs）验证蛋白表达，包括NCI-H1703（EGFR-WT，CLDN3阴性）和EGFR突变型细胞系：HCC827（E19del）、HCC827_AR（E19del/MET扩增）、YU1092（L861Q）、YU1157（L858R）、YU1162（E19del）、YU1150（L858R/T790M）、YU1182（L858R/C797S）和YU1097（E19del/T790M/C797S）。通过病毒转导构建了CLDN3过表达的细胞系（H1703Cld3）。CAR结构设计采用不同长度的cCPE（氨基酸116-319 [C3L]、184-319 [C3M]、194-319 [C3S]），并通过CD8α铰链和跨膜区与4-1BB和CD3ζ细胞内信号域连接。使用流式细胞术分析CAR表达，通过RTCA、LDH实验和ELISA评估抗肿瘤活性，并在H1703、H1703Cld3和CLDN3阳性PDCs的异种移植模型中评估体内疗效。

scRNA-seq分析显示，与EGFR-WT和EGFR-MT相比，EGFR-TKI治疗后患者的CLDN3表达显著升高。H1703被选为CLDN3阴性对照，HCC827、HCC827_AR、YU1092、YU1157、YU1162、YU1150、YU1182和YU1097作为CLDN3+靶细胞。在CAR结构中，C3M表现出最佳的转导效率（46.2%）和平衡的活性，对H1703Cld3产生高浓度的IFN-γ（70,000 pg/mL），且在C3S中未观察到自身反应。C3M-CAR-T细胞针对CLDN3+靶细胞的IL-2、IFN-γ和TNF-α分泌量显著高于CLDN3-。LDH测定和RTCA检测证实，C3M-CAR-T细胞对CLDN3+肿瘤细胞的杀伤作用显著强于对照T细胞。在体内实验中，C3M-CAR-T治疗显著抑制了H1703Cld3和PDCs异种移植瘤的生长。

本研究证实了CLDN3作为基于cCPE的CAR-T疗法在NSCLC中的潜在治疗价值，特别是在克服EGFR-TKI耐药性方面。C3M-CAR-T在体外和体内模型中均表现出强大的抗肿瘤疗效。

利用 CRISPR 介导的表观遗传调控系统增强通用 CAR-T 对 DLL3 阳性小细胞肺癌的持久性

CAR-T长期暴露于抗原和免疫抑制的肿瘤微环境中会导致T细胞耗竭，从而削弱T细胞的抗肿瘤持久性。此外，基于TRAC、HLA或CD52基因敲除的通用型CAR-T（UCAR-T）通常存在功能减弱的问题。先前研究表明，干细胞样T细胞对于抵消耗竭的不良影响至关重要，而耗竭和干细胞相关基因均受表观遗传调控，这为CAR-T疗法提供了一种比基因修饰更安全的替代方案。在本研究中，我们设计了一个通过CRISPR关闭或开启表观遗传调控基因的系统，分别命名为Epi-off和Epi-on，以增强CAR-T和UCAR-T疗法的持久性。并选择与耗竭相关的表观遗传调控基因ARID1A来测试系统功能。

通过慢病毒和电转导介导的CRISPR Epi-off系统构建了ARID1A敲除的DLL CAR-T细胞。在体外进行连续重复的慢性刺激以诱导T细胞耗竭。ARID1A敲除的DLL CAR-T细胞表现出更好的抗肿瘤效果和更少的耗竭，耗竭T细胞群（TIM3+或LAG3+）更少。同时，它们保持了更高比例的TCF-1+、CD62L+Slamf6+亚群和更快的扩增速度，这表明ARID1A敲除导致了更多的干细胞样特征和更长的持久性。在体内，ARID1A敲除的DLL CAR-T表现出更有效和持久的抗肿瘤效果。在接受ARID1A敲除DLL CAR-T的肿瘤小鼠中观察到更长的生存期、更小的肿瘤体积和更多的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）。此外，我们还评估了ARID1A敲除与SUV39H1敲除CAR-T的抗肿瘤效果，SUV39H1是另一种与耗竭相关的表观遗传调控基因。

在每只小鼠回输1×107 CAR-T细胞时，ARID1A敲除CAR-T表现出与SUV39H1敲除CAR-T相当的抗肿瘤效果，但在较低回输剂量（5×106）时优于SUV39H1敲除CAR-T。此外，ARID1A敲除被应用于UCAR-T。在体内，ARID1A敲除在小细胞肺癌小鼠模型中改善了DLL UCAR-T疗法（类似CAR-T），同时毒性有限（类似传统UCAR-T）。此外，我们还建立了一个Epi-on系统以增强CAR-T的持久性和安全性，该系统具有门控结构，当CAR-T识别DLL3+小细胞肺癌时，CRISPR激活组件会被蛋白酶释放到细胞核中以上调特定基因的表达。

研究者建立了一个表观遗传调控系统（Epi-off和Epi-on）以增强CAR-T/UCAR-T的功能。基于该系统的ARID1A敲除DLL3 CAR-T和UCAR-T在体外和体内均表现出更好的持久性、可靠的抗肿瘤效果和低毒性。

TKI联合AZD5851（TGFβRII显性负装甲发现平台设计的抗GPC3 CAR-T）治疗肝细胞癌

AZD5851是一种靶向Glypican-3（GPC3）的CAR-T细胞疗法，其通过显性失活的TGFβRII受体进行装甲，以保护CAR-T细胞免受免疫抑制性细胞因子TGFβ的影响。AZD5851目前正在晚期/复发性肝细胞癌（HCC）患者中进行I/II期临床试验（NCT06084884）。

多靶点TKI索拉非尼和仑伐替尼已被批准用于晚期/复发性HCC的一线治疗。索拉非尼通过阻断Ras/Raf通路、血管内皮生长因子受体（VEGFR）和血小板衍生生长因子受体（PDGFR）来抑制肿瘤细胞增殖和血管生成。仑伐替尼通过靶向VEGFR、PDGFR和成纤维细胞生长因子受体（FGFR）发挥其抗血管生成功能。此外，仑伐替尼还能通过减少肿瘤相关巨噬细胞、髓源性抑制细胞和调节性T细胞的浸润来降低肿瘤微环境中的免疫抑制。基于这些抗肿瘤和免疫调节作用，研究者评估了索拉非尼或仑伐替尼是否能与AZD5851联合增强体内疗效，以及这两种TKIs是否会影响CAR-T细胞的功能。

在体外与GPC3+靶肿瘤细胞共培养后，治疗浓度的索拉非尼和仑伐替尼并未影响AZD5851的存活率、抗原依赖性增殖、活化、效应细胞因子分泌以及靶细胞杀伤能力。在PLC/PRF/5 HCC异种移植模型中，两种TKIs的有效剂量均未损害CAR-T细胞的抗肿瘤功能。高剂量索拉非尼与AZD5851联合仅轻微增强了抗肿瘤疗效，而高剂量仑伐替尼的联合使用则显著提高了肿瘤控制效果，优于单独使用AZD5851。为了进一步探索仑伐替尼与AZD5851的联合应用，我们对仑伐替尼进行了药代动力学建模，以确定在小鼠中达到与人类患者相当暴露水平的剂量。与单独使用CAR-T或仑伐替尼相比，AZD5851与临床相关剂量的仑伐替尼联合显著增强了抗肿瘤疗效和生存率。

仑伐替尼在不影响CAR-T细胞急性存活、增殖、活化、效应细胞因子产生和细胞毒性的情况下，增强了显性失活TGFβRII装甲的GPC3 CAR-T（AZD5851）在体内的抗肿瘤疗效。因此，将AZD5851与仑伐替尼联合使用可能成为HCC患者的一种有前景的联合治疗方案。

间皮素靶向CAR-T疗法FC004治疗铂类耐药卵巢癌：I期试验

铂类耐药性卵巢癌是一种高度侵袭性的妇科恶性肿瘤，治疗选择有限。间皮素（MSLN）在卵巢癌细胞中过度表达，是嵌合抗原受体（CAR）T细胞治疗的一个有前景的靶点。近期证据表明，MSLN-CAR T细胞能够识别并攻击癌细胞，为铂类耐药性卵巢癌提供了潜在的新治疗方法。我们报告了一项针对铂类耐药性卵巢癌患者的FC004（一种MSLN-CAR T细胞疗法）I期研究的结果。

符合条件的患者年龄为18-75岁，经组织学确诊为上皮性卵巢癌且对铂类耐药，且标准治疗失败。MSLN表达≥2或肿瘤阳性率≥40%。患者在接受白蛋白结合型紫杉醇、环磷酰胺和氟达拉滨预处理后，接受单次FC004输注。采用3+3剂量递增设计确定推荐的II期剂量（RP2D），起始剂量为2×10⁶细胞/kg。主要终点为安全性、最大耐受剂量（MTD）和RP2D。关键次要终点包括疾病控制率（DCR）、缓解持续时间（DOR）、无进展生存期（PFS）、总生存期（OS）和药代动力学特征。

截至2025年1月，两例患者入组并接受了2×10⁶细胞/kg剂量的FC004治疗。患者#1，55岁女性，接受了1.09×10⁸ CAR-T细胞。CAR-T细胞浓度在输注后第7天达到峰值。治疗一个月后，患者达到疾病稳定（SD），未出现剂量限制性毒性（DLTs）、细胞因子释放综合征（CRS）或免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS）。患者#2，51岁女性，接受了9.4×10⁷ CAR-T细胞。输注当天出现发热，随后发生肺部感染和3级CRS。CAR-T细胞浓度在第7天达到峰值并逐渐下降。第27天，CD3+细胞中CAR+细胞比例为0.5%。值得注意的是，CA125水平在第11天从964 U/ml降至227 U/ml。患者一个月后去世，可能因感染并发症所致。

初步结果表明，FC004 CAR-T细胞疗法在治疗铂类耐药性卵巢癌中可能疗效有限。一例患者达到SD，另一例患者尽管存在这些不良事件，但CA125水平的下降表明该疗法具有一定的生物活性。这些发现强调了需要谨慎选择患者并进一步优化治疗方案，以提高安全性和疗效。

IB-T101（OUTLAST™ CAR-T产品）治疗CD70阳性透明细胞肾癌

复发/难治性透明细胞肾细胞癌（ccRCC）患者面临治疗选择有限和临床预后不佳的问题，存在未满足的医疗需求。CD70在ccRCC中普遍表达，是CAR-T治疗的一个有吸引力的靶点。IB-T101是一种靶向CD70的自体CAR-T细胞，在OUTLAST™预处理下扩增。OUTLAST™预处理在细胞扩增过程中易于实施，可使CAR-T细胞表现出早期记忆T细胞表型，抵抗肿瘤微环境的抑制信号，并表现出更强的持久性。这些特性有望使IB-T101 CAR-T细胞在ccRCC实体瘤环境中取得优越的临床效果。

本文介绍了一项正在进行的1期、首次人体、开放标签、多中心研究者发起的临床试验，旨在评估IB-T101在既往 VEGF 靶向疗法单独或与免疫检查点抑制剂联合使用后复发的 ccRCC 患者中的安全性和有效性。将患者自体 T 细胞转导编码靶向 CD70 CAR 的慢病毒载体，并使用CRISPR Cas9基因编辑敲除内源性CD70，随后在OUTLAST™条件下扩增。在淋巴细胞清除后，将逐步增加剂量的IB-T101 CAR-T细胞（150 - 500 x 106）输注。研究的主要终点是评估IB-T101的安全性和耐受性。其他研究目标包括评估IB-T101的抗肿瘤活性和药代动力学。相关评估将包括治疗前活检以评估肿瘤中CD70的表达水平。

参考文献：

1.Oh Min Kwon,et al.2025 AACR.Abstract4807.

2.Zichong Peng,et al.2025 AACR.Abstract4816.

3.Nina J. Chu，et al.2025 AACR.Abstract4826.

4.Lin Zhou,et al.2025 AACR.Abstract CT030.

5.Bo Liu,et al.2025 AACR.AbstractCT111.

编辑：Faline

审校：Faline

排版：Faline

执行：Faline

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