CY2-卵清蛋白(CY2-OVA)是由绿色荧光染料CY2卵清蛋白(Ovalbumin, OVA)通过共价结合形成的荧光标记复合物,结合了卵清蛋白的免疫原性与CY2的荧光示踪能力,广泛应用于生物医学研究和纳米技术领域。

一、核心组成与结构特性

卵清蛋白(OVA)

  • 来源与结构:鸡蛋清中的主要蛋白质(占54%-69%),分子量约44.5 kDa,含385个氨基酸残基和4个自由巯基,属于含磷糖蛋白。其结构以α-螺旋和β-折叠为主,中心存在1个二硫键,加热后暴露的巯基可增强胶体稳定性。

CY2荧光染料

  • 光谱特性:CY2是一种绿色荧光染料,激发波长约492 nm,发射波长约510 nm,荧光信号强,适用于共聚焦显微镜、流式细胞术和活细胞成像。
  • 标记原理:通过NHS酯与OVA的氨基反应,形成稳定的酰胺键,实现荧光标记。

CY2-OVA,CY2-卵清蛋白
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CY2-OVA,CY2-卵清蛋白

二、制备方法与关键参数

标记条件

  • pH控制:通常在pH 7.4的PBS缓冲液中进行反应,以维持OVA的天然构象和反应活性。
  • 反应时间:1小时左右即可完成标记,反应效率高。

质量控制

  • 荧光强度:通过荧光光谱仪检测标记后产物的荧光信号,确保标记效率。
  • 抗原性保留:通过ELISA或Western blot验证标记后OVA的抗原性是否保留。

三、注意事项与储存条件

  1. 储存条件:CY2-OVA需保存在2-8°C的干燥环境中,避免反复冻融,以防止蛋白质变性。
  2. 稳定性:在适宜条件下,CY2-OVA可稳定保存2年以上,但需定期检测荧光强度和抗原性。
  3. 安全性:CY2-OVA仅用于科研,不可用于人体实验或临床诊断。