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斑马鱼外周疼痛模型是一种快速、高通量、非侵入性的炎症性疼痛研究平台，广泛用于镇痛药物的筛选与评价。该模型利用佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）一种强效蛋白激酶C（PKC）激活剂局部刺激斑马鱼幼鱼，诱发外周神经敏化和炎症反应，模拟哺乳动物的外周伤害性疼痛状态。

斑马鱼外周疼痛模型构建

选取4日龄（4 dpf）的AB系斑马鱼幼鱼，置于6孔板中（每孔20尾），分为以下组：

  • 对照组（仅胚胎用水）

  • 模型组

  • 阳性对照组（3.0 μg·mL⁻¹ 阿司匹林）

  • 测试药物组

每日更换含药或对照溶液，连续处理3天（至7 dpf），期间每日观察幼鱼存活率与活动状态，剔除死亡或异常个体。

给药结束后，小心移取各组健康幼鱼至24孔板，每孔1尾，加入1.5 mL胚胎用水。适应性培养30分钟（28.5℃避光）。除对照组继续保留在胚胎用水中外，其余各组（模型组、阳性药组以及测试药物组）均转移至新24孔板，孔内预先加入 1.5 mL 含1 μg·mL⁻¹ 佛波酯的溶液，每孔1尾。将24孔板置于28.5℃避光环境中，孵育30分钟，使炎症性外周疼痛模型充分建立。

当斑马鱼暴露于无法逃避的伤害性刺激（如佛波酯诱导的炎症）时，其运动行为会发生特征性改变，表现为活动减少、快速游动次数和距离显著下降。

随后，使用斑马鱼行为分析系统记录各组幼鱼10分钟内的自由运动轨迹，定量评估颈痛颗粒对外周疼痛的镇痛效果。

评估参数

在斑马鱼外周疼痛模型中，疼痛本身无法直接测量，但可通过其引发的可量化行为学改变间接反映疼痛强度。

总运动距离；

快速运动次数与距离（设定速度阈值，如 > 20 mm/s）；快速游动代表逃避/探索动机；疼痛抑制此类主动行为。

慢速运动次数与距离（速度 ≤ 20 mm/s）；

静止时间、移动时间等辅助指标。

模型优势

  • 无需手术或电刺激，操作简便；

  • 高通量：单次可测试数十至上百尾幼鱼；

  • 行为响应稳定、可重复，对经典镇痛药（如阿司匹林、布洛芬）敏感；

  • 适用于天然产物及小分子化合物的初筛。

参考文献

  • OHNESOＲGE N，HEINL C，LEWEJOHANN L．Current methods to investigate nociception and pain in zebrafish［J］．Front Neurosci，2021(15) :632634．

  • 解盈盈,程永波,孙仟,等.斑马鱼模型评价颈痛颗粒外周镇痛作用研究[J].药学研究,2025,44(10):961-966+971.DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2025.10.005.

  • Antinociceptive Analysis of Natural Monoterpenes Eugenol, Menthol, Carvacrol and Thymol in a Zebrafish Larval Model.[J]. Cláudia Alexandra Rocha;Luís M Félix;Sandra Mariza Monteiro;Carlos Venâncio.Pharmaceuticals (Basel, Switzerland).2024

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