CY3-牛血清白蛋白(CY3-BSA)是一种将橙红色荧光染料CY3与牛血清白蛋白(BSA)通过共价键结合形成的荧光标记复合物,在生物医学研究和细胞成像领域具有广泛应用。

一、组成与结构

  • CY3荧光染料:CY3是一种橙红色的荧光染料,具有很强的荧光强度和良好的光稳定性。其激发波长约为550nm,发射波长约为570nm,能够在特定激发波长下发出强烈的橙红色荧光信号。
  • 牛血清白蛋白(BSA):BSA是牛血清中的一种球蛋白,由607个氨基酸残基组成,分子量约为69KDa。它具有良好的溶解性和稳定性,常用作实验室蛋白,能够防止蛋白质的非特异性吸附和降解。
  • 共价结合:CY3通过其活性基团(如NHS酯)与BSA上的氨基基团发生共价反应,形成稳定的酰胺键,从而将CY3标记到BSA上。

结构式:

CY3-BSA,CY3-牛血清白蛋白
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CY3-BSA,CY3-牛血清白蛋白

二、荧光特性

  • 高荧光强度:CY3-BSA在激发光源下能够发出强烈的橙红色荧光信号,适用于荧光显微镜、流式细胞术等荧光检测技术。
  • 光稳定性好:CY3染料具有优异的光稳定性,能够在长时间的光照下保持荧光信号的稳定性,适用于长时间的成像实验。
  • 光谱特性:CY3-BSA的激发波长和发射波长使其与多种荧光滤光片兼容,如TRITC(四甲基罗丹明)滤光片,便于在荧光显微镜中进行观察。

三、制备方法

  1. BSA溶液制备:将BSA溶解在适当的缓冲液中(如PBS,pH约7.4),得到一定浓度的BSA溶液。
  2. CY3-NHS酯溶解:将CY3-NHS酯溶解于无水有机溶剂(如DMSO)中,避免水解。
  3. 反应:在缓冲液中缓慢加入CY3-NHS溶液,保持混合均匀。反应条件通常为室温、避光,反应时间1-2小时。pH控制在7.4-8.0以保证酰胺键形成效率。
  4. 纯化:通过透析、凝胶过滤柱或超滤等方法去除未结合的自由染料和其他杂质,得到纯净的CY3-BSA。
  5. 保存:纯化后的CY3-BSA可冻干保存,保证稳定性。

四、注意事项

  • 避光保存:CY3染料对光敏感,容易发生光漂白。因此,在制备、储存和使用过程中必须严格避光。
  • 反应条件优化:在标记过程中需要优化反应条件(如pH值、温度、反应时间等),以确保标记效率和产物纯度。
  • 质量控制:对制备的CY3-BSA进行严格的质量控制检测,确保其纯度、荧光特性和生物活性符合实验要求。

温馨提示:供应产品仅用于科研,不能用于人体!
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