我国目前仍有逾9000万慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者，现有治疗下功能性治愈仍然存在诸多挑战。华山感染科团队在大型真实世界队列和随机对照临床研究中，明确了即便采用序贯联合等优化策略和优势人群选择，核苷与干扰素等现有抗病毒治疗实现功能性治愈的概率仍然有限，即使在严格筛选患者后，核苷停药仍会有一定的病毒复发概率。团队在前期工作中，HBV核酸原位杂交检测（RNAscope）和免疫组化验证，观察到在长期NA抗病毒治疗，或IFN足疗程治疗后，数量显著减少但持续存在HBV RNA阳性细胞，这些细胞即为狡诈的乙肝病毒慢性感染后藏匿在肝脏内的“储存库”，是功能性治愈难以实现和停药后复发的主要原因，其难以被药物或免疫彻底清除的机制待进一步明确。
近日，复旦大学附属华山医院感染科张文宏教授、仇超教授团队联合多家单位，在肝病领域国际权威期刊Hepatology 上发表了一项题为"Host-viral interaction of HBV infection revealed by single-cell transcriptome jointly profiling the viral replication state"重磅研究。
该团队自主研发了一项名为B-BEST 的基于单细胞测序的新技术，突破了传统技术瓶颈，首次在单细胞水平上“看清”了乙肝病毒在肝细胞内的真实状态，为乙肝功能性治愈提供了全新的视角。传统检测主要靠抽血或分析肝组织，只能看病毒mRNA或蛋白（如HBsAg、HBcAg），而且一次只能测一两个指标，信息很粗糙，残留“顽固”细胞的比例很少。所以无法明确病毒具体感染了哪些肝细胞、病毒这些“顽固”细胞里是活跃复制还是静静储存，也不知道这些细胞怎样影响肝脏炎症病理损伤。这些问题一直困扰着科学家。
随着单细胞测序发展，让我们有望更精细地研究病毒和宿主的关系。然而，传统单细胞测序方法中更适用于检测人的信息，难以有效捕获低拷贝的HBV序列，导致感染病毒的细胞检出率低。打个比方，来源于人的细胞的核酸序列像海水一样多，想抓到里面的病毒核酸，无异于大海捞针。
该团队研发的B-BEST 技术，在常规“钓竿”上加了5个专门抓捕病毒的“自动鱼钩”，能高效捕捉到乙肝病毒的多个关键区域（S、X、pgRNA、rcDNA、cccDNA）。相比传统方法，对病毒序列的检测效率提高了100倍以上，解决了低丰度病毒核酸难以捕获的难题；结合高通量单细胞技术，可以一次性捕获并同时分析数万个细胞，突破了关键技术瓶颈。
同时，该团队还从单细胞水平精准呈现了HBV对宿主细胞的选择性、HBV复制对宿主代谢机制的依赖、HBV感染后肝细胞的响应和清除作用、HBV的免疫逃逸等方面，描述了HBV感染过程中的宿主-病毒交互作用，为乙肝病毒持续感染和功能性治愈的机制提供了新的视角与思路。未来，随着多组学技术和临床抗病毒治疗新药的迭代，B-BEST将持续助力科研人员为终结乙肝威胁提供更精准的科学支撑和突破路径。
本文转载自 ：华山感染
本期编辑：木木
热门跟贴