胶囊制剂中多种亚硝胺类基因毒性杂质分析检测|亚硝基|亚硝胺|化合物|毒性杂质|毒理学|氮化物|致癌

基因毒性杂质是指能够直接或间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌变的化合物；含有基因毒性杂质警示结构，毒性未经证明的化合物称为潜在基因毒性杂质。其中，亚硝胺类基因毒性杂质是典型的代表。根据ICHM7指导原则被定义为第一类即已知致突变致癌物，需控制不超过该化合物特定的可接受限度。

但是亚硝胺的形成机制复杂，其来源贯穿于药品生产全过程，任何疏忽都可能导致风险。例如，在雷尼替丁中检测到高水平的NDMA，形成机制被认为是药物分子本身在储存过程中发生的自身亚硝化；二甲双胍中发现的亚硝胺杂质可能与生产过程中使用的试剂或辅料有关；利福平中检出特有的亚硝胺杂质，如1-甲基-4-亚硝基哌嗪（MNP）和1-环戊基-4-亚硝基哌嗪（CPNP）被认为是API合成的中间体引入。

基因毒性杂质要求检测要在极低浓度和复杂基质下实现对目标物的精准捕捉，对实验室分析技术提出了极高的要求。目前实验室对N-亚硝胺类化合物的检测方法有气相色谱串联质谱法、液相色谱串联质谱法，也有基于新型检测原理的荧光检测法。需要注意的是要对不同基质中N-亚硝胺类化合物检测方法进行研究，开发出相应前处理方法，提高检测灵敏度。

以某款胶囊剂为例，微源检测实验室通过LC-MS/MS串联质谱建立对胶囊制剂中N-亚硝基二甲胺NDMA、N-亚硝基二乙胺NDEA、N-亚硝基二异丙胺NDIPA、N-亚硝基甲基苯胺NMPA等7种亚硝胺杂质含量测定的检测方法，线性范围、精密度、准确度、定量限（LOQ）和耐用性等指标，以及专属性和灵敏度符合检测需求。

根据CPDB数据库中的毒理学数据，通过换算，列出了可供参考的N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺的人体摄入限值，分别为0.096μg·d-1和0.0265μg·d-1。但是大多数N-亚硝胺类化合物的毒性研究仍缺乏充分的人体实验数据，所以在进行毒理学研究时常使用阶段性毒理学阈值，按照长期接触计算，每日允许摄入限值为1.5μg。

每一次对产品的评审或审计，亚硝胺类基因毒性都是最敏感的关注点，随着监管要求的不断升级，制药企业需要投入大量资源进行方法开发、验证和风险评估，这对行业提出了更高的合规成本和专业能力要求。