小李
我在细胞实验上明明观察到很明显的代谢抑制，移植到小鼠身上后怎么完全没效果？
你用的是不是 3D 模型？
师兄
师弟
啊？我用细胞铺板，按照文献里的方案做的，应该没问题吧……
2D 培养简单高效，但回到真实肿瘤的缺氧、酸化环境，结论常常转化无果。换成传统 3D 模型，样本小、信号弱，常规平台灵敏度又测不出来。3D 模型选择也有难度，如果不合适，轻则数据难解释，重则推倒重来。
安捷伦 Seahorse XF Flex 平台专为 3D 模型优化了灵敏度和检测范围，下面这套 3D 模型工作流程，把每一步的关键都拆解清楚了，花 1 分钟参与安捷伦 Seahorse 能量代谢学术营挑战知识小测，看完你就知道怎么做了——答对还有机会赢取国潮文创福袋、Hp 内胆鼠标垫、鼠标、文具套装、京东卡、收纳包等 150 份精美好礼！（答案都藏在文章里哦）
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常用 3D 模型如何选择？
在开展代谢检测之前，首先需要明确：所选模型是否恰当？2D 贴壁培养虽具备操作简便、通量高的优点，但细胞平铺于塑料表面，丧失了原始组织中的三维结构及细胞间相互作用。相比之下，3D 模型能够维持接近生理状态的细胞形态、基质相互作用以及物质交换微环境，从而更真实地反映体内的代谢特征与药物响应。目前常用的体外 3D 模型主要包括：
选对模型是获取可用数据的第一步。在此基础上，还需要合适的检测工具及标准的工作流程，从而确保代谢信号测定的稳定性与可重复性。
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安捷伦 XF 3D 应用流程：从样本到数据的整套方案
面对 3D 样本代谢检测的种种挑战，安捷伦提供了一套完整的 XF 3D 应用工作流程，从仪器平台、专用耗材、检测试剂到软件分析，让组织切片和类器官等模型的实时代谢分析变得可行。整个工作流程的核心包括四个环节：
专用分析仪：Seahorse XF Flex 分析仪是 24 孔平台，专为 3D 样本和代谢活性较高的细胞类型优化了灵敏度和检测范围，兼顾 2D 细胞、悬浮细胞与 3D 模型的多重需求。
专用微孔板和捕获环：XF Flex 3D Capture 微孔板-L 在每孔底部设计了固定尺寸的样品仓，配合网格压环将组织或类器官稳稳定位，消除位移带来的信号干扰。
专用检测试剂盒：XF 3D Mito Stress Test 试剂盒针对组织样本优化了抑制剂工作浓度，简化了条件摸索过程，直接提供可用的实验模板。
智能软件支持：Wave Pro Controller 内嵌 3D 模板，自动计算 OCR/PER；Seahorse Analytics 提供归一化、剂量-响应分析和多文件对比，结果直接导出至 GraphPad Prism 等工具。
工具配齐了，真正上手时，很多新手都会在细节翻车——组织位移、气泡残留、信号衰减，这些问题即便借助高精度仪器也难以完全避免。下面这份避坑指南，梳理了实验中最为常见的四个问题及应对建议帮你提前避坑。
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避坑指南：4 个最容易忽视的细节
细节一：捕获环安装不当或残留气泡，导致信号剧烈波动
常见原因为网格下方存在气泡，或组织未被充分压紧而发生位移
安装捕获环后，务必在明场成像下使用 4 倍镜逐孔检查，确认网格紧贴孔底、组织居中且无气泡残留
细节二：OCR 持续下降，难以区分药物效应与组织活性衰退
检测起始 O₂ 水平应维持在约 152 mmHg，每个测量周期开始时需完全恢复，结束时不应低于 40 mmHg
若 O₂ 恢复不足，通常提示组织量过大或缓冲液氧合不充分，需相应调整组织尺寸或加强预充氧
细节三：重复实验结果不一致，缺乏可靠的内部对照
每板至少保留 3 个不加抑制剂的对照孔，否则各批次间缺乏可比性，数据解读失去可靠基础
细节四：pH 超出传感器线性范围，影响测量准确性
XF 传感器的pH线性检测范围为 7.4 ± 0.1 至 6.5 ± 0.1，超出该区间测量准确度将显著下降
检测前需严格校准缓冲液 pH；必要时在 FCCP 注射液中额外补充底物（如丙酮酸），以维持高呼吸负荷下的 pH 稳定
代谢是细胞功能的核心，驱动能量产生，也调控生物合成、氧化还原平衡、线粒体功能和细胞命运决定。当代谢失衡，细胞功能随之紊乱，疾病便悄然发生。通过实时功能性代谢分析，可以深入洞察细胞激活、增殖、分化和死亡背后的能量逻辑，从而揭示疾病机制。
无论你研究的是癌细胞的代谢逃逸、代谢疾病的能量失衡、神经退行性病变中的线粒体损伤、干细胞分化的代谢开关，还是免疫细胞的活化与耗竭，安捷伦 Seahorse XF 平台都能提供对应的活细胞功能性代谢分析方案——从细胞线粒体压力测试、底物氧化依赖性解析、实时 ATP 速率测定、糖酵解速率定量，到专为 3D 组织与类器官优化的 XF Flex 高灵敏度检测流程，助您在各自领域把代谢机制一层层拆解透彻。
内容策划：王丹琦
内容审核：朱晓芳
题图来源：图虫创意
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