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1、取材

组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据具体要求取自人体或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握组织学、解剖学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，不得任意切取组织作为制片材料，具体要求如下：

（1）材料新鲜：人体组织一般在离体后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

（2）组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0×2.0×0.3cm,以使固定液能迅速而均匀的渗入组织内部。

（3）勿挤压组织块：切取组织块的刀要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

（4）规范取材部位：要准确地解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

（5）选好组织块的切面：根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切的或横切往往是显示组织形态结构的关键。

（6）保持材料的清洁：如果组织块上有血液、污物、粘液。粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

（7）保持组织的原有形态：新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形，为此可将组织完全展平。

2、固定

固定是技术室工作的第一步，也是在整个制片过程中无法补救的一步。从人体取下的组织须立即放入固定液中进行固定、标本与固定液的比例为1:4~20、组织块不宜过大、最常用的固定液是10%甲醛。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止了细胞内酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、酶类等转变为不溶性物质、以保持原有的结构与生活时相仿。

3、水洗

固定后水洗（10~20min）通常被很多人忽视，而水洗不彻底，容易造成脱片和染色不鲜艳。

4、脱水和透明

所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于有机溶剂的渗入，这一过程称为脱水。脱水是否彻底直接关系到组织是否充分透明。

5、浸蜡、包埋

使组织浸入组织中，取代组织中含有的透明剂。

将浸蜡后的组织置于融化的固体石蜡中，石蜡凝固后，组织即被包在其中的过程为包埋。

6切片和贴片

（1）修整蜡块

（2）准备好切片用具：毛笔、镊子、刀片等。

（3）安装蜡块

（4）安装切片刀：将切片刀安装在切片机刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切片时不产生震动。

（5）切片：厚度为4~6μm。

（6）展片：用镊子夹起蜡带轻轻平铺在恒温水面上、将略皱的蜡带自然展平。

（7）贴片、烘片：待切片在恒温水面上充分展平后、将蜡片捞到载玻片的中端处置入60~65℃烘烤箱内烤片15~30min，脱去融化组织间隙的石蜡。

7染色和封片

常用的染色方法是苏木素—伊红染色法，简称H.E染色法。这种方法对任何固定液固定的组织和应用各种包埋法的切片均可使用。苏木素是一种碱性染料，可使组织中的碱性物质染成蓝色，如细胞核中的染色质等。伊红是一种酸性染料，可使组织中的嗜酸性物质染成红色，如多数细胞的胞质、核仁等在切片中均呈红色。

来源：“山东省妇保院病理科”微信公众号

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