产品名称:CY5-MAL ,CY5-马来酰亚胺 ,CAS:1437796-65-0的核心反应机理
一、核心反应机理(MAL 巯基定点标记)
中性 pH 6.5–7.5 条件下,马来酰亚胺双键与游离巯基(Cys-SH)发生迈克尔加成,生成不可逆稳定硫醚键。
选择性较强:与巯基反应速率比伯氨基快 1000 倍以上,几乎不与赖氨酸氨基副反应;
产物硫醚键耐胞内高 GSH 还原环境,不会像 OPSS 二硫键发生断裂;
反应温和,室温避光即可,不破坏多肽、抗体、蛋白天然构象。
⚠️关键前提:标记前底物必须透析除去TCEP、DTT、β-ME等游离还原剂,否则还原剂优先消耗 MAL 活性基团。
二、CY5 荧光光学核心优势
1. 远红光波段,样本自发荧光极低
细胞、组织内源黄素、NADH 自发荧光集中在蓝 / 绿 / 橙通道;646/664 nm 远红区间背景干扰远低于 FITC、TRITC,厚组织切片、共聚焦成像信噪比良好。
2. 仪器通用性强
完美匹配共聚焦 633 nm He-Ne 激光、647 nm 激光器;流式标配 Cy5/APC 滤片,属于实验室通用标准远红通道染料,无需特殊设备。
3. pH 荧光稳定性优秀
pH 4–9 荧光强度基本稳定;溶酶体酸性环境不会显著淬灭,优于 FITC、香豆素类染料,适合胞内囊泡长时间追踪。
4. 多色成像兼容性出色
经典多色组合:DAPI(蓝)+FITC(绿)+Cy3(橙)+CY5(远红);光谱串扰小,适合四色共定位、免疫细胞多色分群。
5. 标记后荧光亮度高
花菁共轭体系消光系数高,微量标记即可获得清晰信号,适合低丰度蛋白、单细胞弱靶点成像。

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三、CY5-MAL 分子整体差异化优势
1. 巯基定点修饰,适合单半胱氨酸突变蛋白 / 抗体
区别于 CY5-NHS 随机标记赖氨酸,CY5-MAL 可实现位点唯一标记,可控标记比,最大限度保留抗体、配体生物活性,广泛用于抗体荧光探针、ADC 中间体构建。
2. 脂溶性带来良好应用优势(对比 Sulfo-CY5-MAL 磺化水溶性版本)
脂溶性更强,具备一定细胞膜穿透能力,适合胞内蛋白标记;
易嵌入脂质纳米粒疏水层,可用于脂质体、LNP 荧光标记;
易与金银纳米颗粒、疏水高分子材料共溶偶联。
3. 共价标记牢固,适合长效活体示踪
硫醚键化学稳定,体内循环不易脱落染料,适合小动物活体荧光成像、生物分布定量。
4. 操作灵活,适配有机相 / 含水有机相体系
可先溶于 DMSO/DCM,再加入缓冲液进行水相标记;适合多肽、疏水生物分子、纳米材料修饰。
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
文章来自西安齐岳生物小编wyh。

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