肿瘤细胞释放的细胞外囊泡在肿瘤进展和免疫抑制中发挥着重要作用，但这些囊泡在循环中的昼夜动态变化此前一直缺乏有效的研究手段。2026年8月24日，厦门大学宋彦龄教授团队在《Nature Cell Biology》发表了题为“Circadian control of circulating tumour-derived extracellular vesicle secretion affects targeted therapy efficacy”的研究论文，他们开发了ctEV-CLOCK技术，实现了对新生循环肿瘤源性囊泡的高时间分辨率捕获，并基于其昼夜节律特征优化了靶向药物的给药时间。
研究团队将代谢糖工程标记与肿瘤标志物引导的点击化学结合起来构建了ctEV-CLOCK系统。他们给荷瘤小鼠注射含叠氮基团的非天然糖Ac₄ManNAz，新生成的囊泡因此带上化学“时间戳”，随后利用靶向EpCAM的双价适配体进行特异性捕获和富集。实验数据显示这套方法的检测灵敏度达到56.6 ng/mL总囊泡蛋白或2.24×10⁷颗粒每毫升，并且能够检出代谢标记处理后仅2小时的新生囊泡，回收产量与传统超速离心方法相当。他们还用EpCAM基因敲除细胞和未标记对照组验证了系统的特异性，证明只有同时具备叠氮标记和EpCAM阳性的新生囊泡才能产生可检测信号。
利用ctEV-CLOCK，研究团队在乳腺癌、黑色素瘤、结肠癌及黑色素瘤PDX等多种小鼠模型中均观察到了ctEVs丰度的昼夜波动。夜间分泌的囊泡总量大约是日间的2.7倍，这种节律在倒置光周期条件下同步反转，并且在持续黑暗环境中依然维持，说明其受内在生物钟驱动而非单纯依赖外界光照。功能实验进一步显示夜间分泌的ctEVs促进肿瘤细胞迁移和侵袭的能力显著强于日间分泌的同等数量囊泡，体内输注实验也发现夜间ctEVs对肿瘤生长的促进作用更为明显。
研究团队在4T1乳腺癌模型中，夜间ctEVs中有23种蛋白上调、30种下调，其中乙酰肝素酶（HPSE）等促血管生成和细胞外基质重塑相关蛋白显著富集。研究团队据此在夜间给予HPSE抑制剂OGT2115，肿瘤生长抑制效果明显优于日间给药组，CD31染色显示夜间治疗组肿瘤微血管结构严重破坏而日间组相对完整。当使用GW4869抑制小囊泡分泌或敲除Rab27a基因后。
在B16-F10黑色素瘤模型中，ctEVs表面的CD47分子同样表现出夜间高表达的特征，蛋白质组学鉴定到230种蛋白夜间上调，CD47是其中之一。研究团队在夜间给予抗CD47抗体后肿瘤生长受抑更显著，肿瘤组织中CD8⁺T细胞浸润增加，血浆TNF和IFN-γ水平升高，而在Bmal1基因敲除小鼠中这些节律和治疗时间依赖性均不复存在。他们还检测了药物在不同时间点的药代动力学和肿瘤组织CD47表达水平，发现两者并无昼夜差异，从而确认ctEVs的节律变化是影响治疗效果的关键因素，而非药物暴露量或靶点本身的波动。
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