Phytomedicine I 加味寿胎丸通过调控Treg免疫耐受改善子宫衰老相关早期妊娠丢失（广州中医药大学团队）|phytomedicine|介导|免疫|妊娠|子宫衰老|寿胎丸|机构做试管孕|母胎

2026年9月16日，广州中医药大学第一附属医院、岭南医学研究中心等单位研究团队在《Phytomedicine》（中科院1区，IF=11.3，TOP期刊）发表题为 “Jianwei Shoutai Pills enhances maternal-fetal immune tolerance via regulatory T cell modulation to ameliorate uterine aging-associated early pregnancy loss” 的研究论文。该研究由 Fengli Guan、Bo Xia、Manshuang Chen 等完成，Songping Luo 和 Jie Gao 为通讯作者。论文发表于Phytomedicine，DOI为10.1016/j.phymed.2026.158807。论文信息显示，该研究于2025年9月15日投稿，2026年4月11日修回，2026年9月14日接收。作者单位包括广州中医药大学第一附属医院、岭南医学研究中心、中国药科大学、广东省中医药临床研究院以及中医药综合征国家重点实验室等。

本研究聚焦高龄孕妇相关子宫衰老导致的早期妊娠丢失问题，探讨经典中药复方加味寿胎丸（Jianwei Shoutai Pill, JSP）的保护作用及分子机制。研究发现，JSP能够改善自然衰老小鼠子宫组织衰老、炎症反应和胶原沉积，并通过延缓胸腺退化，提高母胎界面调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）的比例和功能，从而增强母胎免疫耐受。进一步结合转录组、代谢组、网络药理学、分子对接及分子动力学模拟分析，研究发现HIF-1α可能是JSP调控能量代谢重编程的重要作用靶点，JSP通过降低HIF-1α表达、减少乳酸异常积累并恢复ATP水平，优化母胎界面的免疫代谢微环境。

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【摘要】

背景：子宫衰老是导致高龄女性生育能力下降和流产的重要因素。调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）在胚胎植入过程中发挥维持母胎免疫耐受的重要作用，并与高龄女性早期妊娠丢失密切相关。已有研究表明，加味寿胎丸（Jianwei Shoutai Pill, JSP）能够降低早期妊娠丢失，但其在子宫衰老相关妊娠丢失中的Treg调控机制仍未明确。

目的：评价JSP对子宫衰老相关早期妊娠丢失的改善作用，并探索其潜在作用机制。方法：研究采用超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）对JSP化学成分进行鉴定。通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色、Masson染色以及免疫组织化学分析评价衰老小鼠子宫组织及E10.5胎盘-子宫单元的组织学变化。利用流式细胞术、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、Western blot和ELISA检测Treg细胞比例及功能变化。同时结合转录组学、代谢组学、网络药理学、分子对接以及分子动力学模拟分析JSP发挥作用的潜在机制。结果：JSP减少了衰老小鼠子宫组织中的衰老细胞积累、胶原沉积以及炎症反应，改善了胚胎植入所需的子宫微环境。JSP通过延缓年龄相关胸腺退化，提高蜕膜Treg细胞比例。

转录组与代谢组联合分析显示，JSP能够调节能量代谢重编程，提高ATP水平，优化母胎界面的免疫代谢微环境，从而改善Treg细胞功能并降低衰老小鼠早期流产发生率。

进一步的网络药理学、分子对接和分子动力学模拟分析提示，HIF-1α可能是JSP调控能量代谢的重要靶点。JSP能够降低HIF-1α表达，减少母胎界面过量乳酸积累，并恢复ATP水平。

结论：JSP通过抑制年龄相关胸腺退化，提高胎盘-子宫单元中Treg细胞比例，并优化母胎界面免疫微环境，从而恢复Treg免疫抑制功能、增强母胎免疫耐受，最终减少衰老小鼠妊娠丢失。

该研究揭示了传统中药调控子宫衰老相关妊娠丢失的新机制，并为高龄妊娠相关疾病研究提供了潜在干预策略。

研究背景及科学问题

随着社会发展和生活方式变化，越来越多女性推迟生育年龄，高龄妊娠（advanced maternal age, AMA）相关生殖问题受到广泛关注。子宫作为胚胎植入和胎儿发育的重要器官，其衰老变化会影响妊娠维持。除卵巢储备下降和卵母细胞质量降低外，子宫衰老同样是影响高龄女性生殖结局的重要因素。衰老相关子宫表现为炎症细胞浸润、胶原沉积以及血管反应性受损，这些变化会降低子宫内膜容受性并影响植入后的蜕膜化过程，从而导致植入率下降、临床妊娠成功率降低以及活产率下降。

母胎界面需要在免疫排斥和免疫耐受之间维持精确平衡。胎儿作为具有半同种异体特征的组织，需要通过母体免疫系统调控实现持续存活。其中，调节性T细胞（Treg）是一类表达CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺特征的T细胞亚群，可通过分泌白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）和转化生长因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β）抑制过度免疫反应，促进胚胎植入并维持妊娠。蜕膜Treg主要来源于胸腺来源Treg（thymus-derived Treg, tTreg）和外周诱导Treg（induced Treg, iTreg），两者共同参与早期妊娠建立。

随着年龄增长，胸腺功能下降可能导致Treg生成不足，使胎盘中Treg细胞积累减少，从而增加妊娠丢失风险。同时，免疫衰老过程中伴随的代谢重塑也可能限制Treg细胞增殖和自我更新能力，影响母胎免疫稳态维持。

传统中医药在改善女性生殖功能和治疗不孕、流产方面具有一定研究基础。加味寿胎丸（JSP）是在经典寿胎丸基础上优化形成的复方，由菟丝子、桑寄生和续断组成。已有研究提示，JSP可通过调节肠道菌群、抑制母胎界面炎症、减少ROS积累和铁沉积，以及促进TGF-β1介导的Treg分化等多种途径改善妊娠丢失。

然而，JSP在子宫衰老相关妊娠丢失中的作用机制仍未完全明确。因此，本研究利用自然衰老小鼠模型，结合组织学分析、免疫学检测、多组学分析以及网络药理学方法，系统评价JSP改善子宫衰老相关早期妊娠丢失的作用，并探索其调节Treg免疫功能及母胎界面代谢重塑的分子机制。

重要发现及亮点

JSP化学成分分析

为了明确加味寿胎丸（Jianwei Shoutai Pill, JSP）的化学组成，研究人员首先利用超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）对JSP中的化学成分进行分析。通过传统中药高分辨质谱数据库筛选潜在化合物，并根据峰面积计算相对含量。

结果显示，JSP总离子流图（total ion chromatogram, TIC）能够反映其整体化学组成。研究人员最终鉴定出JSP中共含有28种化学成分，其中包括异槲皮素（isoquercitrin，1.218%）以及Heriguard（11.865%）等主要成分。具体成分信息见Supplementary Table 1。

图1：JSP总离子流图。（A）正离子模式。（B）负离子模式。

JSP改善衰老小鼠胎儿发育并降低早期胚胎吸收率

为了评价JSP对子宫衰老相关早期妊娠丢失的改善作用，研究人员在实验小鼠胚胎第10.5天（embryonic day 10.5, E10.5）观察胚胎植入情况及胎儿发育状态。

实验结果显示，年轻小鼠组（Young）中，胚胎沿子宫纵轴均匀分布，表现出正常的胎儿发育状态。而衰老小鼠组（Old）出现植入胚胎数量减少、局部胚胎吸收、妊娠囊和胚胎体积减小等异常表现。

进一步分析发现，与年轻组相比，衰老小鼠表现出明显降低的胚胎附着子宫重量、植入位点数量、妊娠囊重量、妊娠囊直径以及增加的胚胎吸收率。

JSP干预后，无论低剂量（JSP-L）还是高剂量（JSP-H）处理，均能够显著增加E10.5时含胚胎子宫重量和植入胚胎数量，改善妊娠囊及胎儿发育，并降低胚胎吸收率。

上述结果表明，JSP能够通过降低胚胎吸收、改善胚胎植入成功率以及促进胎儿发育，减少衰老小鼠早期妊娠丢失。

图2：JSP改善衰老小鼠胎儿发育并降低早期胚胎吸收率。（A）实验方案示意图。（B）E10.5胚胎外观形态代表性图片。比例尺=5 mm；箭头表示胚胎吸收部位。（C）妊娠囊代表性图片。比例尺=1 mm。（D）胎儿代表性图片。比例尺=1 mm。（E）不同妊娠阶段小鼠体重变化。（F）E10.5含胚胎子宫重量比较（n=6）。（G）植入位点数量比较（n=6）。（H）妊娠囊重量比较（n=6）。（I）妊娠囊直径比较（n=6）。（J）胚胎吸收率比较（n=6）。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

JSP改善衰老小鼠子宫炎症、胶原沉积及细胞衰老

胚胎成功植入依赖于囊胚与子宫内膜之间复杂的相互作用。为了进一步明确JSP对子宫衰老微环境的影响，研究人员对小鼠子宫形态、炎症水平、纤维化变化以及衰老标志物进行了系统评价。

结果显示，年轻组和衰老组小鼠体重及绝对子宫重量无明显差异，但衰老小鼠子宫指数显著降低。组织学分析发现，衰老小鼠子宫出现结构退化，包括子宫内膜变薄以及腺体减少。

在炎症方面，衰老小鼠子宫组织中IL-6水平升高，而抗炎因子IL-10水平下降。同时，Masson染色显示衰老小鼠存在明显胶原沉积，TGF-β表达升高。此外，免疫组织化学检测发现p21阳性衰老细胞明显积累。

JSP处理后，上述衰老相关变化得到改善。JSP能够改善子宫组织形态，减少IL-6表达以及衰老细胞积累，同时降低胶原沉积并调节TGF-β水平。其中，两种剂量均表现出改善作用，但仅JSP-L组对IL-10表达产生显著影响。

这些结果提示，JSP能够改善衰老相关子宫微环境，为胚胎植入提供更有利条件，并降低衰老小鼠妊娠丢失。

图3：JSP改善衰老小鼠子宫炎症、胶原沉积以及细胞衰老。（A）实验设计示意图。（B）各组小鼠外观。（C）各组小鼠体重检测。（D）各组小鼠子宫代表性图片（比例尺=5 mm）。（E）各组子宫重量比较。（F）子宫指数比较（n=8），计算公式：子宫指数=子宫重量（g）/体重（g）×1000。（G）子宫组织HE染色（上方比例尺=500 μm，下方比例尺=100 μm）。（H-I）IL-6表达水平（n=4）。（J-K）IL-10表达水平（n=4）。（L）各组子宫组织Masson染色（比例尺=100 μm）。（M-N）TGF-β表达水平（n=4）。（O）p21免疫组织化学染色（比例尺=100 μm）。（P-Q）p21表达定量分析（n=4）。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

JSP保护胸腺结构并提高衰老小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例

调节性T细胞（regulatory T cell, Treg）对于胚胎植入和妊娠维持具有重要作用。由于蜕膜Treg细胞主要来源于胸腺，因此研究人员进一步探讨JSP是否能够通过改善胸腺功能调节Treg细胞比例。

研究人员首先检测了衰老相关胸腺和脾脏变化，并评价JSP干预效果。

结果显示，与年轻小鼠相比，衰老小鼠出现明显胸腺萎缩，胸腺指数降低。组织学分析发现，年轻小鼠胸腺皮质区域染色致密，淋巴细胞排列紧密，并具有清晰的皮髓质分界；而衰老小鼠胸腺体积缩小，皮髓质界限模糊，并出现明显髓质萎缩。

在脾脏中，衰老导致脾脏重量增加，并伴随组织结构破坏，包括白髓萎缩以及滤泡结构异常。

JSP处理后，小鼠胸腺重量、胸腺指数以及胸腺组织结构均得到明显改善，同时脾脏微结构也有所恢复，但脾脏重量和脾指数未出现显著变化。

随后，研究人员利用流式细胞术检测胸腺、脾脏以及外周血中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例。

结果发现，与年轻组相比，衰老小鼠胸腺Treg细胞比例显著下降，而脾脏Treg细胞比例升高；外周血Treg细胞比例虽然呈下降趋势，但差异未达到统计学显著水平。

JSP低、高剂量处理均能够提高胸腺Treg细胞比例。JSP-L组降低了脾脏Treg细胞比例，JSP-H组也表现出类似趋势，但未达到统计学显著水平。此外，各组外周血Treg细胞比例未观察到明显变化。

上述结果提示，JSP能够缓解年龄相关胸腺退化，并改善胸腺Treg细胞减少现象。

图4：JSP保护胸腺并提高衰老小鼠CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例。（A）实验方案示意图。（B）胸腺代表性图片。（C）各组小鼠胸腺HE染色（上方比例尺=1000 μm，下方比例尺=200 μm），并对胸腺重量和胸腺指数进行定量分析（n=7）。（D）脾脏代表性图片。（E）各组脾脏HE染色（上方比例尺=1000 μm，下方比例尺=500 μm），并对脾脏重量和脾指数进行定量分析（n=7）。（F）流式细胞术分析实验流程。（G）外周血、胸腺和脾脏中Treg细胞比例（n=3）。（H-J）外周血、胸腺和脾脏Treg细胞比例定量柱状图（n=3）。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

JSP在妊娠第10.5天提高衰老小鼠胸腺Treg细胞比例

由于妊娠过程中性激素能够调节胸腺Treg细胞产生，并促进Treg细胞向胎盘区域积累，从而降低胎儿免疫排斥风险，研究人员进一步评价JSP在妊娠状态下对Treg细胞调控作用是否持续存在。

研究人员在胚胎第10.5天（E10.5）处死小鼠，收集母体胸腺、脾脏以及外周血，并利用流式细胞术检测Treg细胞比例。

结果显示，与妊娠前检测结果一致，JSP低、高剂量处理均显著提高了衰老小鼠胸腺Treg细胞比例。

相比之下，外周血和脾脏中的Treg细胞比例未出现显著变化。

这些结果表明，JSP能够在妊娠过程中持续促进胸腺Treg细胞维持。

图5：JSP提高妊娠第10.5天衰老小鼠胸腺Treg细胞比例。（A、C、E）流式细胞术分析外周血、胸腺和脾脏中的Treg细胞比例。（B、D、F）外周血（B）、胸腺（D）和脾脏（F）Treg细胞比例定量柱状图（n=3）。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

JSP增强衰老小鼠母胎界面Treg细胞比例及免疫调节功能

为了进一步明确JSP是否能够改善母胎界面的免疫耐受状态，研究人员在E10.5检测胎盘-子宫单元（placenta-uterus unit）中的组织结构、Treg细胞比例以及免疫功能相关指标。

HE染色结果显示，年轻小鼠胎盘-子宫结构完整，迷路区（labyrinth zone）发育良好，并含有丰富血窦，同时蜕膜组织排列紧密。

相比之下，衰老小鼠表现出母胎界面结构异常，包括迷路区狭窄、血窦数量明显减少以及蜕膜细胞排列紊乱。

JSP低、高剂量处理均能够改善上述组织结构异常。

进一步利用流式细胞术检测发现，衰老小鼠胎盘-子宫单元中Treg细胞比例下降，同时FOXP3表达降低。

免疫功能检测显示，衰老小鼠母胎界面中促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平升高，而IL-10水平降低。

JSP-L处理能够显著提高Treg细胞比例和FOXP3表达，而JSP-H对Treg比例影响不明显。然而，两种剂量JSP均能够抑制促炎细胞因子表达，并增强IL-10产生。虽然JSP-H组IL-10升高、IL-1β下降呈趋势性变化，但未达到统计学显著水平。

此外，研究人员进一步检测Treg功能相关分子，包括程序性死亡蛋白1（programmed cell death protein 1, PD-1）、T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域蛋白3（T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3, Tim-3）、CC趋化因子受体7（CC-chemokine receptor 7, CCR7）及其配体CCL19。

结果发现，衰老小鼠母胎界面中PD-1、Tim-3、CCR7和CCL19水平均显著升高。JSP干预后，这些异常表达模式得到逆转，但JSP-H组Tim-3水平未发生显著变化。

上述结果提示，年龄相关胸腺退化导致母胎界面Treg细胞数量下降，并伴随免疫调节功能异常；JSP能够改善Treg细胞比例和功能，从而优化母胎免疫耐受环境。

图6：JSP增强衰老小鼠母胎界面Treg细胞比例及功能。（A）实验设计示意图。（B）E10.5胎盘-子宫单元代表性HE染色图像。I：子宫-胎盘结构放大图；II：迷路区；III：蜕膜。比例尺=200 μm。（C）E10.5胎盘-子宫单元Treg细胞比例流式细胞术分析（n=3）。（D）Western blot检测各组FOXP3蛋白表达（n=3）。（E）RT-qPCR检测各组Foxp3 mRNA表达（n=4）。（F）RT-qPCR检测Il-6、Il-1β、Tnf-α和Il-10 mRNA表达（n=4）。（G-N）胎盘-子宫单元中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-10、PD-1、Tim-3、CCR7和CCL19水平，采用ELISA检测（n=4）。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

高龄流产患者蜕膜组织中Treg细胞功能受损

前述动物实验结果表明，JSP能够改善衰老小鼠母胎界面的Treg细胞比例和免疫调节功能。为了进一步验证这一现象是否同样存在于人类高龄妊娠丢失过程中，研究人员收集了不同年龄及妊娠结局患者的蜕膜组织进行分析。

研究对象包括三组：

正常妊娠组（normal pregnancy, NP）：年龄＜35岁；
自然流产组（spontaneous abortion, SA）：年龄＜35岁；
高龄自然流产组（spontaneous abortion-advanced maternal age, SA-AMA）：年龄≥35岁。

HE染色和Masson染色结果显示，SA组和SA-AMA组患者蜕膜组织均存在结构紊乱以及胶原沉积增加。

进一步分析发现，与NP组和SA组相比，SA-AMA组蜕膜组织中衰老相关标志物p16和p21表达升高，同时FOXP3表达明显降低。虽然SA组FOXP3表达也呈下降趋势，但差异未达到统计学显著水平。

随后，研究人员检测Treg细胞功能相关分子。

RT-qPCR结果显示，SA组和SA-AMA组蜕膜组织中Il-6、Tnf-α和Il-1β mRNA表达升高，而Il-10表达降低。

蛋白水平检测显示，SA-AMA组患者蜕膜组织中IL-6和TGF-β水平升高，而IL-10水平降低。

此外，仅在SA-AMA组蜕膜组织中检测到PD-1和Tim-3明显升高。

这些临床样本结果与动物实验结果相一致，提示高龄相关流产伴随促炎性蜕膜微环境形成，并可能导致Treg细胞功能下降，从而影响母胎免疫耐受。

图7：高龄自然流产患者蜕膜组织中Treg细胞抑制功能下降。（A）实验设计示意图。（B）蜕膜组织代表性HE染色和Masson染色（比例尺=200 μm）。（C）p21和p16免疫组织化学染色（比例尺=200 μm）。（D-E）RT-qPCR检测各组P21和P16 mRNA表达（n=5）。（F-G）Western blot检测各组FOXP3蛋白表达（n=3）。（H）RT-qPCR检测Foxp3 mRNA表达（n=3）。（I）RT-qPCR检测Il-6、Il-1β、Tnf-α和Il-10 mRNA表达（n=5）。（J-N）ELISA检测蜕膜组织中IL-6、IL-10、TGF-β、PD-1和Tim-3水平（n=7）。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

JSP调控妊娠第10.5天胎盘-子宫单元转录表达谱

为了进一步解析JSP改善母胎免疫环境的分子机制，研究人员选择在恢复免疫耐受效果较好的JSP-L组进行转录组分析。

研究人员收集E10.5时各组6份蜕膜组织样本进行RNA测序，并通过主成分分析（principal component analysis, PCA）评价不同处理组之间的整体基因表达差异。

结果显示，年轻组、衰老组以及JSP处理组样本在PCA分析中呈现明显分离，提示JSP能够改变衰老相关转录表达模式。

差异表达基因（differentially expressed genes, DEGs）分析显示：

年轻组与衰老组之间共发现2719个DEGs，其中1943个基因下调，776个基因上调；
衰老组与JSP组比较，共发现1692个DEGs，其中670个基因下调，1022个基因上调。

热图分析进一步显示，衰老导致的基因表达变化能够被JSP干预部分逆转。

KEGG通路富集分析显示，JSP调节的差异基因主要涉及HIF-1α信号通路、MAPK级联通路以及中心碳代谢相关过程。

这些结果提示，JSP可能通过调控代谢相关通路改善衰老状态下母胎界面的功能异常。

图8：JSP对妊娠第10.5天胎盘-子宫单元转录表达谱的影响。（A-C）PCA分析显示不同实验组样本分布情况。（D）年轻组与衰老组之间DEGs火山图。（E）衰老组与JSP组之间DEGs火山图。（F）不同实验组差异表达基因维恩图。（G）年轻组与衰老组之间DEGs热图。（H）衰老组与JSP组之间DEGs热图。（I）年轻组与衰老组之间KEGG通路富集分析。（J）衰老组与JSP组之间KEGG通路富集分析。

JSP调节衰老小鼠血清代谢谱变化

由于转录组结果提示JSP可能影响代谢相关过程，研究人员进一步利用非靶向代谢组学分析E10.5小鼠血清代谢变化，以探索JSP对整体代谢状态的调节作用。

研究人员采用基于HPLC-MS平台的非靶向代谢组学方法进行检测。

结果显示：

年轻组与衰老组之间共发现89个差异积累代谢物（differentially accumulated metabolites, DAMs），其中72个代谢物下调，17个代谢物上调。

JSP干预后，与衰老组相比，共检测到80个DAMs，其中22个代谢物下调，58个代谢物上调。

多变量统计分析显示，各实验组之间具有明显分离趋势，并通过置换检验得到验证。

热图分析显示，衰老组代谢变化方向与年轻组相反，而JSP处理能够较大程度逆转这些异常变化。

进一步KEGG富集分析发现，差异代谢物主要富集于中心碳代谢相关通路。

中心碳代谢又称能量代谢，主要包括糖酵解、三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle, TCA cycle）以及磷酸戊糖途径（pentose phosphate pathway, PPP），这些结果提示JSP可能通过调节能量代谢相关过程改善衰老小鼠母胎界面功能。

图9：JSP对妊娠第10.5天血清代谢组的影响。（A）年轻组与衰老组之间DAMs火山图。（B-C）年轻组与衰老组之间OPLS-DA得分图及对应置换分析。（D）衰老组与JSP组之间DAMs火山图。（E-F）衰老组与JSP组之间OPLS-DA得分图及对应置换分析。（G）年轻组与衰老组之间DAMs热图。（H）衰老组与JSP组之间DAMs热图。（I）年轻组与衰老组之间DAMs的KEGG通路富集分析。（J）衰老组与JSP组之间DAMs的KEGG通路富集分析。

JSP通过转录组与代谢组联合分析调控母胎界面能量代谢重编程

为了进一步探索JSP改善母胎界面免疫微环境的潜在机制，研究人员对转录组和代谢组数据进行了整合分析。

首先，研究人员利用Spearman相关分析评估差异表达基因（differentially expressed genes, DEGs）与差异积累代谢物（differentially accumulated metabolites, DAMs）之间的相关性，并通过热图进行展示。

随后，将DEGs和DAMs进行九象限分析以及KEGG通路联合富集分析。

结果显示，转录组和代谢组变化均显著富集于中心碳代谢相关通路，提示JSP可能通过调控能量代谢改善衰老相关母胎界面异常状态。

进一步分析能量代谢关键相关基因发现：

与年轻组相比，衰老组中糖酵解关键酶Ldhb相对丰度升高；

而三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle, TCA cycle）关键酶Idh1以及线粒体编码ATP合酶组成成分mt-Atp8相对丰度降低。

JSP处理后，上述异常变化得到明显逆转。

此外，磷酸戊糖途径（pentose phosphate pathway, PPP）限速酶Pgd和Taldo1的相对丰度在三组之间未观察到显著差异。

这些结果提示，JSP能够调节胎盘-子宫单元中的线粒体能量代谢过程。

图10：转录组和代谢组联合分析。（A）DEGs与DAMs之间相关性的热图。（B）DEGs和DAMs九象限分析图。（C）转录组和代谢组数据整合KEGG通路分析。（D-H）比较Ldhb、Idh1、mt-Atp8、Pgd和Taldo1的相对丰度。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

JSP改善糖酵解与三羧酸循环代谢异常，恢复母胎界面能量稳态

在多组学分析基础上，研究人员进一步检测了胎盘-子宫单元中糖酵解和TCA循环相关代谢酶水平，以验证JSP对能量代谢重塑的调控作用。

研究人员首先介绍了糖酵解和TCA循环中的关键代谢节点：

磷酸果糖激酶（phosphofructokinase, PFK）催化果糖-6-磷酸生成果糖-1,6-二磷酸；

丙酮酸激酶（pyruvate kinase, PK）催化磷酸烯醇式丙酮酸生成丙酮酸和ATP；

在缺氧条件下，乳酸脱氢酶A（lactate dehydrogenase A, LDHA）促进丙酮酸转化为乳酸；而在有氧条件下，丙酮酸则进入线粒体并转化为乙酰辅酶A，参与TCA循环。

TCA循环中的关键调控酶包括丙酮酸脱氢酶（pyruvate dehydrogenase, PDH）、琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase, SDH）和异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase, IDH），共同调控碳流、能量输出以及ATP合成。

实验结果显示，与年轻组相比，衰老小鼠胎盘-子宫单元中糖酵解相关酶LDHA、PFK和PK表达显著升高。

与此同时，PDH水平降低，导致线粒体丙酮酸输入减少，并伴随TCA循环相关酶SDH和IDH下降。

代谢结果进一步显示，衰老组乳酸水平升高，而ATP生成降低。

JSP处理后，上述异常代谢状态得到改善：

增强TCA循环活性；
抑制过度乳酸积累；
恢复ATP水平。

但在PK水平方面，JSP干预后虽然呈改善趋势，但未观察到统计学显著差异。

这些结果表明，JSP能够纠正衰老状态下母胎界面的代谢偏移，促进能量代谢稳态恢复。

图11：JSP调节衰老小鼠胎盘-子宫单元糖酵解和三羧酸循环代谢。（A）糖酵解和TCA循环代谢通路示意图。（B）RT-qPCR检测Sdh、Pdh、Idh、Ldha、Pfk和Pkm2 mRNA表达（n=4）。（C-H）采用ELISA检测胎盘-子宫单元中SDH、PDH、IDH、LDHA、PFK和PK水平（n=3）。（I）ELISA检测胎盘-子宫单元中L-乳酸水平（n=6）。（J）ELISA检测胎盘-子宫单元中ATP水平（n=8）。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

网络药理学、分子对接及分子动力学模拟提示HIF-1α是JSP调节能量代谢的重要潜在靶点

为了进一步寻找JSP调节能量代谢重编程的关键调控因子，研究人员结合网络药理学、分子对接以及分子动力学模拟进行了深入分析。

网络药理学分析整合了JSP主要活性成分与子宫衰老相关基因之间的信息。

结果显示，HIF-1α可能是JSP发挥作用的重要潜在靶点。同时，JSP核心成分之一槲皮素（quercetin）与HIF-1α表现出较强结合能力。

分子对接分析显示，槲皮素与HIF-1α之间的结合能为−18.861 kcal/mol。

随后，研究人员利用100 ns分子动力学模拟进一步验证该结合稳定性。

结果显示：

蛋白-配体复合物RMSD值稳定在0.25–0.35 nm之间；
小分子RMSD波动范围为0.02–0.06 nm；
RMSF值低于0.25 nm，提示蛋白残基柔性较低；
复合物回转半径（Rg）约为2.8 nm；
SASA由215 nm²下降至198 nm²，提示结构更加紧密。

吉布斯自由能景观分析显示，低能量构象主要集中于RMSD 0.2–0.4 nm以及Rg 2.7–2.9 nm区域。

静电势分析进一步支持槲皮素与HIF-1α之间存在稳定结合。

综合分析表明，HIF-1α可能是JSP调控母胎界面能量代谢的重要作用靶点。

图12：网络药理学分析、分子对接及分子动力学模拟结果。（A）JSP活性成分潜在靶点与子宫衰老相关基因交集的维恩图。（B）药物成分-靶点相互作用网络。（C）分子对接结果可视化。（D）复合物RMSD曲线。（E）小分子RMSD曲线。（F）蛋白RMSF曲线。（G）复合物Rg曲线。（H）复合物SASA曲线。（I）吉布斯自由能三维景观图。（J）吉布斯自由能二维景观图。（K）静电表面势分析。

JSP通过抑制HIF-1α表达改善母胎界面糖酵解异常并恢复ATP水平

为了进一步验证HIF-1α在JSP调节能量代谢中的作用，研究人员检测了胎盘-子宫单元中HIF-1α表达变化，并分析其与代谢相关基因及代谢物之间的关系。

结果显示，与年轻组相比，衰老组胎盘-子宫单元中HIF-1α表达显著升高，而JSP处理能够使HIF-1α表达恢复至接近年轻水平。

进一步通过Spearman相关分析发现，HIF-1α与关键糖酵解相关基因Ldha存在显著相关性。

研究结果显示，JSP通过降低HIF-1α表达，减少异常乳酸积累，并恢复ATP水平。

综合来看，JSP发挥保护作用至少部分依赖于调节HIF-1α介导的线粒体糖酵解和TCA循环代谢过程。

图13：JSP抑制衰老小鼠胎盘-子宫单元中HIF-1α表达。（A-B）Western blot检测各组HIF-1α蛋白表达（n=3）。（C）RT-qPCR检测各组Hif-1α mRNA表达（n=4）。（D）HIF-1α与胎盘-子宫单元基因及代谢物之间关系分析。（E）JSP通过HIF-1α调控糖酵解和TCA循环示意图。“ns”表示无统计学差异，*P < 0.05，**P < 0.01。

JSP改善子宫衰老相关早期妊娠丢失的潜在机制模型

图14总结了JSP改善子宫衰老相关早期妊娠丢失的潜在作用机制。