基础信息
- 中文名称:异硫氰酸荧光素标记纤维蛋白原,又称绿色荧光素标记纤维蛋白原
- 英文名称:FITC-Fibrinogen,Fluorescein Isothiocyanate-labeled Fibrinogen
- 纯度规格:≥95%
- 外观形态:淡黄色至淡绿色冻干粉末
- 溶解性:易溶于PBS缓冲液(pH7.4)、生理盐水,部分溶于DMSO、DMF等有机溶剂,人源纤维蛋白原在碱性缓冲液中溶解性较差
- 存储条件:密封置于-20℃低温避光环境保存,避免反复冻融,保质期1年,取用后需充入惰性气体延长保存时间
- 安全提示:仅用于科研实验,不可用于人体实验或临床医疗
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特性
- 生物活性保留:FITC通过共价键标记,不破坏纤维蛋白原的天然结构,标记后仍保留完整的凝血活性和生物学功能,不影响其与血小板、凝血因子的相互作用
- 优异荧光性能:FITC最大激发波长约495nm,最大发射波长约520nm,可发出明亮的绿色荧光;荧光量子产率高,背景信号低,易于被荧光显微镜、流式细胞仪等仪器检测,检测灵敏度可达纳克级
- 共价结合稳定:FITC的异硫氰酸基团可与纤维蛋白原分子表面的氨基末端或赖氨酸残基的伯胺反应,形成稳定的硫脲键,在实验过程中不易发生解离,保证荧光信号稳定,适合长时间动态观察
- 检测兼容性好:绿色荧光通道是生物成像中最常用的通道之一,可与红色/远红色荧光染料搭配,实现多分子同时标记检测,适配绝大多数常规荧光检测设备,无需特殊改装
标记原理与制备方法
标记的核心是利用FITC活性基团与氨基的特异性反应,具体流程如下:
- 反应条件设定:在pH9.0的弱碱性缓冲体系中进行反应,保证纤维蛋白原保持溶解状态,同时激活异硫氰酸基团的反应活性
- 共价偶联反应:将FITC按照一定摩尔比(通常FITC:纤维蛋白原=5~10:1)加入蛋白溶液,低温避光搅拌反应数小时,FITC的异硫氰酸基团与纤维蛋白原的赖氨酸残基氨基反应,生成稳定硫脲键
- 纯化去除杂质:通过透析或凝胶过滤色谱分离去除未反应的游离FITC和小分子杂质,获得纯净的标记产物
- 质量鉴定:通过紫外分光光度法测定标记度(F/P比),验证蛋白纯度与凝血活性,合格产物进行冻干处理
温馨提示:供应产品仅用于科研,不能用于人体!
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