人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA Kit

作者：深圳市恒昊生物科技有限公司

细胞间粘附分子1（ICAM-1）也被称为CD54，属于免疫球蛋白超家族成员，是一种介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间相互粘附作用的跨膜糖蛋白。ICAM-1主要表达于血管内皮细胞、免疫细胞等多种细胞表面，参与免疫应答、炎症反应、细胞迁移等多种生理过程，在炎症性疾病、肿瘤发生转移、心血管疾病等多种疾病的发生发展中发挥重要作用。

当膜结合型ICAM-1被蛋白酶水解后，胞外段会脱落进入体液，形成可溶性细胞间粘附分子1，即sICAM-1。体液中sICAM-1的浓度变化，可以反映体内ICAM-1的表达和激活水平，因此sICAM-1是临床研究中监测炎症活动、肿瘤进展、评估自身免疫病活动度的重要指标。

sICAM-1 ELISA Kit就是针对该指标开发的标准化检测套装，一般试剂盒内会提前备好检测所需的全部试剂：预包被抗sICAM-1抗体的96孔酶标板、sICAM-1标准品、生物素标记的检测抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素、底物溶液、洗涤液、终止液等，用户无需自行核心试剂，仅需准备样本和基础实验设备就可以完成检测，大幅降低了检测门槛。

打开网易新闻 查看精彩图片

注意事项

为了保证检测结果的准确性和重复性，使用试剂盒时需要注意以下事项：

试剂保存与准备

  1. 试剂盒收到后，应当立即按照说明书要求将不同组分分类存放：酶标板、标准品、抗体等需要放在-20℃冰箱避光保存，洗涤液、终止液等可以保存在2-8℃。避免反复冻融标准品和抗体，收到第一次使用时建议分装后再保存。
  2. 实验前需要将所有试剂从冰箱取出，平衡至室温（一般为20-25℃）后再开启使用，低温试剂如果没有平衡温度，会影响抗体结合效率，导致结果偏差。
  3. 开封后未使用完的酶标板条需要密封放回铝箔袋中，加入干燥剂密封，防止受潮变质。

样本处理与保存

  1. sICAM-1检测常用样本为血清、血浆或细胞培养上清。血清样本建议采集后尽早分离，避免溶血，因为红细胞破裂释放的血红蛋白会干扰显色反应，导致吸光度偏高；使用抗凝血浆时，需要注意选择合适的抗凝剂，EDTA、肝素抗凝一般对结果影响较小，但要避免使用肝素浓度过高的样本。
  2. 如果样本不能及时检测，需要分装后放在-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。反复冻融会导致蛋白降解，使检测结果偏低。
  3. 细胞培养上清样本需要去除细胞沉淀和杂质，离心后取上清检测即可，如果浓度超出试剂盒检测范围，需要提前用样本稀释液稀释后再检测，否则会出现"钩状效应"，导致结果不准确。

实验操作环节

  1. 加样时要保证每个孔加样量准确，避免交叉污染，更换样本时要更换枪头。孵育过程中要控制好温度和时间，严格遵循说明书要求，温度过高或孵育时间过长都会导致非特异性结合增加，背景升高；温度不够或孵育时间不足会导致结合不完全，结果偏低。
  2. 洗涤步骤是去除未结合物质，降低背景值的关键环节，一定要按照说明书要求洗涤足够次数，洗涤不充分会导致背景过高，重复性差。手工洗涤时要注意每孔都加满洗涤液，洗够次数后拍板要充分，去除残余液体。
  3. 底物显色需要避光，温度和时间要控制得当，避免显色过度，当标准品高浓度孔变色明显时就可以加入终止液，不要等所有孔都变深再加，否则会超出线性范围，影响结果准确性。
  4. 每次检测都需要同时做标准曲线和空白对照，不要重复使用同一批次的标准曲线，不同批次试剂盒的曲线可能存在偏差，会影响定量准确性。