近日，免疫细胞表面糖链的动态重塑与细胞状态和免疫活性密切相关，现有单细胞糖基化方法多检测已存在的糖表位，难以直接解析新生唾液酸化过程。南京鼓楼医院杨荣、田甜、郭宏骞团队在《自然·通讯》发表了题为《GlycoStamp-seq: Single-cell nascent sialoglycometabolomics captures sialylation dynamics in immune cells of an oxaliplatin-treated bladder cancer mouse model》的研究，他们开发了GlycoStamp-seq，将Ac4ManNAz代谢糖工程、DBCO-ssDNA点击化学与单细胞RNA/TCR测序和scDyna-seq结合，在奥沙利铂治疗的膀胱癌小鼠模型中追踪新生唾液酸化动态。
研究团队合成DBCO-ssDNA，并用LC-MS确认偶联成功，他们比较AcManNAz、AcGalNAz和AcGlcNAz后，发现AcManNAz标记效率更高，50 μM处理3天对T24、A549和A549/DDP细胞数量影响较小，并且标记强度随浓度升高。DBCO-Cy5.5和Cy5-(dT)25流式检测显示，三种细胞系都能把新生唾液酸化转为DNA信号，测序也检测到对应读段。转录组相关性分析中，Ac4ManNAz标记组和对照组整体表达谱高度一致，Pearson R接近0.998。
在体内，他们用scDyna-seq评估标记对动态转录的影响，4sU标记的T-to-C转换率在两组间相近，基因检测数和线粒体基因比例也保持稳定，PCA和t-SNE聚类没有明显分离。奥沙利铂治疗的MB49膀胱癌模型中，CD45+免疫细胞的新生唾液酸化整体升高，T细胞比例增加，T细胞唾液酸化升高最明显，p=5.541e-08。研究团队注释了4672个细胞，得到T细胞、NK细胞、B细胞、中性粒细胞、树突状细胞和单核吞噬细胞等亚群。
他们按新生唾液酸化强度把CD8+ T细胞分为Gly.hi、Gly.mid和Gly.low，Gly.hi组富集CD8效应T细胞和增殖效应T细胞，TCR克隆扩增也更多，Tnfrsf9、Entpd1和Ifng与唾液酸化强度正相关，Sell、Lef1和Malat1呈负相关。CD8 Tpro_eff细胞在奥沙利铂治疗后唾液酸化显著升高，p<0.0004，并且高表达Ifng、Cd69、Tnf和Top2a、Mki67、Mcm3，低表达Pdcd1、Lag3、Havcr2。OT-1模型中，Gly.hi细胞对N4肽脉冲MB49和MB49-OVA的杀伤更强，分泌更多IFN-γ、TNF、CCL5和IL-10。过继转移后，Gly.hi T细胞带来更好的肿瘤控制和更长的生存期，p=0.0170，主要器官H&E和肝肾功能未见明显毒性。研究团队还重建了OXP TCR1，转入TCR敲除Jurkat细胞后，与MB49共培养可诱导CD69上调，MHC-I阻断会减弱该诱导。
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