【民族药理学】山东中医药大学揭示通脉益智方通过抑制单胺氧化酶减少多巴胺代谢从而改善卒中后认知障碍|中风|单胺氧化酶|受体|多巴胺|民族药理学|益智方|莫里斯

✍导语

卒中后认知障碍（PSCI）是一种在卒中后发生并持续长达6个月的认知功能缺陷综合征。临床数据显示，卒中幸存者中累计发病率高达60%，但目前治疗手段有限，西药存在副作用、疗效有限等短板。

通脉益智方（TMYZD）是一味经典的中国民族药方，源自当归芍药散和生慧汤，促进血液循环、补益肾精、化痰开窍，长期以来被用于治疗卒中后遗症的失忆症和痴呆症。一篇发表于Journal of Ethnopharmacology（IF：6.8）的研究揭示了通脉益智方能通过多巴胺通路改善卒中后认知障碍。

PART 01

题目及作者信息

PART 02

️文献摘要：

【目的】

研究旨在探讨TMYZD对PSCI的保护作用，并验证其是否通过调节多巴胺代谢途径发挥作用，以阐明其分子靶点和药理学基础。

【方法】

应用网络药理学来预测治疗靶点，利用代谢组学结合质谱法来鉴定调控通路。体内，评估了中动脉闭塞/再灌注大鼠的认知功能、突触超微结构和关键靶点蛋白。体外，使用在缺氧-葡萄糖剥夺/再氧合条件下表达单胺氧化酶-B（MAOB）的HT22细胞进行靶点验证

【结果】

PSCI大鼠表现出严重的认知功能下降和突触结构损伤。单胺氧化酶-A（MAOA）和单胺氧化酶-B（MAOB）被确定为核心治疗靶点。TMYZD显著调节了多巴胺通路，上调酪氨酸羟化酶和多巴胺受体D2，下调MAOA/MAOB，并改善了突触损伤。MAOB的过表达部分消除了TMYZD的神经保护作用，证实了MAOB是关键靶点。

【结论】

TMYZD通过调节多巴胺代谢、提高多巴胺水平和增强突触可塑性来改善PSC I的认知功能，其中MAOB是关键靶点。这些发现为TMYZD在PSC I中的民族医药应用提供了科学证据。

PART 03

研究思路与方法

研究思路：

本研究采用网络药理学+代谢组学+动物体内实验+细胞体外实验多层次研究，完整链条验证靶点通路。

PART 04

核心亮点

通脉益智方（TMYZD）通过多巴胺通路改善卒中后认知障碍（PSCI）。

TMYZD抑制单胺氧化酶，提高多巴胺水平，并增强突触可塑性。

MAOB是TMYZD在PSCI治疗中的关键治疗靶点。

多组学与体外/体内验证揭示了TMYZD的神经保护作用。

PART 05

研究结果

图1：PSCI模型大鼠表现出伴随突触可塑性降低的认知功能障碍

图 1. PSCI模型大鼠表现出伴随突触可塑性降低的认知功能障碍。A：假手术组和PSCI组海马CA1区突触的代表性透射电镜图像。红色箭头指示突触结构。B、C：海马CA1区突触密度的定量分析。分别显示突触密度和突触后密度的定量分析的直方图。数据以平均值±标准误差（n=6）表示。D：莫里斯水迷宫空间探测测试的代表性轨迹图；右上角为目标象限。（a）假手术组；（b）PSCI组。E：莫里斯水迷宫测试中在目标象限停留的时间百分比（n=6）。F：改良神经严重程度评分（mNSS）（n=6）。G：新物体识别测试中的辨别指数（n=6）。H：mNSS与莫里斯水迷宫空间探测测试中在目标象限停留时间的百分比之间的相关性分析。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。

图2：TMYZD改善PSCI模型大鼠的认知功能障碍

A：治疗28天后各组大鼠水迷宫轨迹的代表性图像。B：在水迷宫目标象限中花费的时间百分比（n = 6）。C：大鼠在空间导航测试中逃逸潜伏期的变化。D：空间导航测试中从入口到平台点的游泳路径长度。E：空间探测测试中平台穿越的次数。F：治疗28天后的mNSS评分。G：mNSS评分与水迷宫目标象限花费时间百分比的相关分析。H：新物体识别测试中的辨别指数。与模型组相比，ns：p > 0.05，不显著；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。

图3：TMYZD 改善细胞损伤并增强突触可塑性

A：海马CA1区突触超微结构的代表性透射电镜图像（上：低倍，下：高倍）。B：突触密度、PSD厚度、活动区长度、突触间隙宽度及突触界面曲率的定量分析（n = 6）。C：脑组织代表性HE染色图像。D：基于HE染色的梗死面积定量分析（n = 6）。E：脑梗死区存活神经元密度（n = 6）（细胞/mm2). F: 脑梗死代表性TTC染色图像。G: 基于TTC染色的梗死体积定量（n = 6）。H: 海马体PSD95荧光强度定量（n = 6）。I: 使用免疫荧光染色检测的鼠海马体脑组织中PSD95的代表性荧光图像。与模型组相比，*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。

图4：TMYZD调节酪氨酸代谢并含有与MAO相关的成分

A：OPLS-DA 评分图，显示各组之间的代谢特征分离。B：差异代谢物的 KEGG 通路富集分析。C：差异代谢物的层次聚类热图。D：TMYZD 成分的代表性 LC-MS/MS 色谱图。

图5：TMYZD调节酪氨酸代谢并恢复海马体多巴胺稳态

A：海马神经递质代谢谱的主成分分析（PCA）得分图。B：差异神经递质及相关代谢物的层次聚类热图。C：差异代谢物的KEGG通路富集分析。D：海马多巴胺浓度。E：海马HVA浓度。F：HVA/DA比值。与模型组相比，p > 0.05，不显著；*p < 0.05，**p < 0.01。

图6：MAOA和MAOB是TMYZD在DA代谢途径中的关键靶点

A：TMYZD相关靶点、卒中相关差异表达基因和认知障碍相关基因的维恩图。B：候选治疗靶点的PPI网络。C：MCODE衍生核心靶点网络。D：核心靶点的KEGG通路富集分析。E：显示TMYZD草药、核心靶点相关化合物和核心靶点之间关系的草药-化合物-靶点网络。

图7：TMYZD通过调节MAOA和MAOB的表达来调节DA代谢

A：大鼠海马脑组织中TH、DRD2、MAOA和MAOB蛋白表达水平的Western blot检测。B：大鼠海马脑组织中MAOA和MAOB RNA表达水平的q-PCR检测，在三个独立实验中进行。C：免疫荧光染色检测大鼠海马脑组织中TH、DRD2和MAOB的分布及蛋白表达水平。（a）定量统计结果；（b）代表性荧光图像。D：MAOA活性。E：MAOB活性。F：DA水平。与模型组相比，p > 0.05，不显著；*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。

图8：TMYZD治疗的血清通过抑制MAOB保护HT22细胞免受缺氧/再灌注损伤

A：使用CCK-8法检测TMYZD治疗的血清在缺氧/再灌注损伤的HT22细胞中的浓度筛选。B：PSD95和MAOB表达的代表性Western blot分析。C：PSD95和MAOB蛋白表达的定量。D：使用qPCR检测的MAOB mRNA表达，在三个独立实验中进行。E：HT22细胞中PSD95表达的代表性免疫荧光图像（比例尺=10 μm）。F：PSD95荧光强度的定量。与缺氧/再灌注+TMYZD组相比，*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。

PART 06

结论

研究整合了网络药理学、代谢组学和体内以及体外实验系统地研究了TMYZD调节多巴胺代谢途径的治疗机制。通过抑制MAO表达，TMYZD提高了多巴胺水平并延长了其作用时间，从而增强了突触可塑性并改善了PSCI，其中MAOB被确定为关键靶点。这种多维度的研究为TMYZD的神经保护作用提供了机制见解，并为其临床应用提供了坚实的实验基础。此外，生物活性化合物和代谢物相关途径的鉴定突显了TMYZD衍生物在未来药物开发中的治疗潜力。而且，这为MAO抑制剂类药物的应用开辟了新的途径。未来的研究应侧重于阐明TMYZD的药理活性成分，阐明其多靶点和多组分相互作用，并验证其对多巴胺能信号传导和突触可塑性产生影响的因果机制。此类研究将为TMYZD在PSCI的临床转化和治疗开发提供更坚实的机制基础。

机制解析

酪氨酸是多巴胺前体；MAOA/MAOB（单胺氧化酶）会分解多巴胺，把多巴胺转化为高香草酸HVA，多巴胺耗竭，认知受损。

✅模型组大鼠：海马MAOA、MAOB酶活性大幅升高，多巴胺被大量降解，DA含量下降，代谢产物HVA升高，HVA/DA比值上升。

✅通脉益智方干预后：

1.上调酪氨酸羟化酶TH（多巴胺合成关键酶）、多巴胺D2受体DRD2，促进多巴胺合成、提升受体响应；

2.抑制MAOA、尤其显著抑制MAOB的基因、蛋白表达以及酶活性，减少多巴胺被分解；

3.结果：海马多巴胺DA含量升高，HVA下降，HVA/DA比值下降，多巴胺内环境稳态恢复。

一图概括