【案鉴·创新】| 配对前移，源头控错——HTRF 赋能非对称双抗细胞株开发|克隆|小分子抑制剂|抗体|抗原|细胞株|非对称|高通量

非对称双抗被视为突破单靶点药物治疗局限的重要方向，其核心在双靶点协同调控--有望实现疗效升级与克服耐药，正成为全球创新药企差异化布局的重点。

然而，非对称双抗的多链共表达结构，使细胞株开发始终面临随机链错配的隐患：既要在海量克隆中精准识别正确配对的抗体，又要突破“只测titer、不测配对”的传统检测局限，防止高错配克隆流入下游工艺。

KiH、CrossMab等主流分子改造策略仅能弱化错配，难以根除。针对这一瓶颈，凯莱英生物CLD团队建立了成熟的HTRF高通量筛选方案。实战应用案例显示，依托 “双抗原特异性标记 + 相对定量检测” 策略，项目实现了从低配对率pool到高配对率clone的筛选跃升，优选单克隆的正确配对率显著提升。

这条路径不受非对称双抗结构差异限制、通用性强，为复杂抗体的高效开发提供了可复制、可推广的路径。

一.行业痛点：非对称双抗的链错配

非对称双抗凭借双靶点协同调控优势，已成为肿瘤免疫、自身免疫疾病领域的热门创新方向，可突破传统单靶点药物的治疗局限，实现疗效升级与耐药改善，是新药企业差异化管线布局的重点方向。但多链共表达的特殊结构，使其在细胞株开发阶段极易发生随机链错配，产生大量无效错配抗体，严重影响产物均一性与药物质量。

行业主流KiH、CrossMab等分子改造手段仅能弱化错配问题，无法彻底杜绝错配，且实际运用效果参差不齐。同时传统抗体titer检测仅能统计总表达量，无法甄别抗体配对质量，易导致高错配克隆流入下游工艺，造成纯化难度提升、成本增加、研发周期延长等一系列问题。作为技术驱动创新的CDMO，凯莱英生物承接并高质量交付了诸多商业化非对称双抗项目，依托丰富实战经验打磨出成熟的HTRF高通量筛选方案，可高效解决各类非对称双抗的克隆筛选难题。

二.技术原理：HTRF 相对定量筛选核心机制

HTRF（均相时间分辨荧光）是免洗涤、高通量、高特异性的均相检测技术，适配非对称双抗早期单克隆筛选。该技术依托高灵敏度相对定量检测能力，突破传统检测“只测titer、不测配对”的短板，可同步筛选高配对率、高表达的优质克隆。技术核心采用双抗原特异性标记体系，将两种靶向抗原分别偶联荧光供体与受体基团，构建专属检测探针。

仅结构完整、配对正确的非对称双抗，可同时结合两种标记抗原，触发荧光共振能量转移并产生可定量阳性信号；各类错配抗体因结构缺陷无法完成双抗原结合，无信号输出。基于精准的相对定量逻辑，HTRF可一次性完成克隆配对质量与表达水平的双重评估，无需样品预处理，适配克隆孔板阶段高通量筛选，从CMC早期剔除劣质克隆，大幅提升筛选精准度与研发效率，提升产品质量。

三.应用实证：不同结构非对称双抗项目筛选效果验证

非对称双抗细胞池普遍存在配对水平参差不齐、错配抗体占比高的问题，增加了CMC开发难度。凯莱英生物CLD团队依托成熟的HTRF筛选体系，对pool来源的单克隆进行定向筛选与相对定量分析，可精准富集高性能优质克隆。

多个覆盖不同分子结构的商业化项目数据显示，优选单克隆正确配对率可显著提升，实现了从低配对率pool到高配对率clone的质的飞跃。应用结果充分证明，HTRF技术不受非对称双抗结构差异限制，通用性极强，可有效剔除错配抗体干扰，稳定提升产物均一性与批次稳定性，为后续工艺放大与管线推进筑牢基础。

四.技术价值与拓展：从双抗到高端多抗的广谱适配性

HTRF技术的核心优势是实现配对率质控前置，颠覆行业“早期盲筛、后期除杂”的传统模式。CLD团队在单克隆早期阶段精准剔除高错配风险克隆，从源头降低错配占比，有效精简工艺流程、缩短研发周期、控制项目成本，全面提升复杂抗体细胞株开发的成功率与稳定性。

该技术可完美兼容各类主流非对称双抗平台。从行业发展以及技术前瞻性来讲，多特异性抗体逐步向结构更复杂的三抗甚至四抗进行迭代，多链共表达带来的筛选难题更为突出，而HTRF可继续优化并适配三抗早期筛选场景，具备广阔的拓展应用空间，将持续为客户创新抗体管线的临床转化赋能。

五.结语：CLD专属筛选方案赋能复杂抗体高效开发

链错配问题长期制约非对称双抗开发的质量与效率。凯莱英生物依托成熟的HTRF高通量筛选技术与丰富商业化项目经验，精准攻克复杂抗体早期筛选核心痛点，稳定输出高配对、高表达的优质细胞株，以标准化CDMO服务，全面助力客户创新双抗、高端多抗管线高效进阶。

从早期盲筛到精准质控，HTRF相对定量筛选技术正在改变非对称双抗细胞株开发的筛选模式。凯莱英生物CLD团队以成熟的高通量筛选体系为支撑，将配对率质控前置至单克隆筛选源头，助力多个商业化项目实现优选单克隆正确配对率的显著提升，切实缩短开发周期、降低CMC风险。

面向多特异性抗体加速迭代的行业趋势，凯莱英生物将持续深耕复杂抗体早期开发关键技术，以可复制、可推广的筛选方案赋能全球合作伙伴，让更多创新抗体药物更快、更稳地走向临床与商业化，惠及全球患者。

参考文献

【1】Degorce F, Card A, Soh S, et al. HTRF: A technology tailored for drug discovery—a review of theoretical aspects and recent applications[J]. Curr Chem Genomics, 2009, 3: 22-32.

【2】Greenway H, Wang J. Evaluation of high-affinity monoclonal antibodies and antibody-drug conjugates by homogenous time-resolved FRET[J]. ACS Med Chem Lett, 2024, 15(9): 1598-1605.