Western Blot（WB）作为生命科学与医学研究中验证蛋白表达的核心实验，其数据严谨性很重要。
2026 年以来，顶刊对 WB 实验的要求迎来全面收紧：从内参蛋白验证到原始图像提交，一系列新规成为投稿硬性门槛，不少课题组因未及时适配，遭遇论文返修、发表延期甚至毕业受阻，最近隔壁实验室的师兄，就在 WB 上吃了亏。
哎，我们组一师兄投《Nature Communications》 的稿，因没验证 GAPDH 稳定性，被要求全重做 WB 数据了。
这也太影响进度了，毕业怕是都要受牵连吧？
可不是嘛，而且这不是个例，是 NC 2026 WB 新规的硬性要求。
听说这标准还推广到整个 Nature 子刊矩阵了，以后顶刊投稿这关必过啊。
长期以来，科研人员习惯性选用GAPDH、β-actin 作为内参蛋白，却极少验证其在药物处理、细胞胁迫、组织特异性等特定实验条件下的表达稳定性，这种「想当然」的操作模式，使得 WB 数据的可重复性与准确性大打折扣。
《Nature Communications》Western blot 要求
多刊同步收紧
内参稳定性成硬性指标
值得关注的是，收紧 WB 投稿规范的并非只有《Nature Communications》，《JBC》、《Drug Metabolism and Disposition》、《Acta Pharmacologica Sinica》、《British Journal of Pharmacology》、《JBMR Plus》等多本权威期刊均已同步更新要求，明确将内参蛋白表达稳定性验证列为硬性指标。
内参蛋白若未经验证存在表达不稳定的情况，直接作为 WB 实验归一化对照会造成定量结果出现偏差，使得失去准确性与科学性，还会在投稿时被期刊审稿人质疑数据严谨性与可重复性，轻则被要求补充验证实验、重做全部 WB 数据，造成课题进度滞后、论文发表延期，重则直接被拒稿。
各大期刊 WB 内参要求汇总表
内参不稳定？
可以考虑替代方案-总蛋白染色
针对传统管家蛋白（如 β-actin、GAPDH）在特定实验条件下易出现表达波动、难以满足定量归一化可靠性要求的问题，各期刊均明确提出了更为稳健的替代策略 ——总蛋白染色。相较于易受细胞状态、处理因素影响的单一内参蛋白，总蛋白染色可直接反映每泳道上样的总蛋白量，能更全面、客观地校正上样与转印差异。
《JBC》Western blot 要求截图
《Drug Metabolism and Disposition》Western blot 要求截图
（部分期刊推荐使用总蛋白染色）
总蛋白染色包括：Stain-Free（免染）、丽春红 S、固绿、考马斯亮蓝等，其中 Stain-Free 是当前较为主流、期刊认可度高的总蛋白内参方法。
Stain-Free 总蛋白染色是一种基于三氯化合物荧光标记的 WB 内参归一化技术，通过在电泳后对膜上全部蛋白进行荧光染色，实现对总蛋白上样量的精准定量，替代传统内参蛋白（如 GAPDH/ACTIN），避免实验处理对内参蛋白表达的干扰，同时具备线性范围宽、灵敏度高、可全程可视化的优势。
无需验证内参稳定性，直接满足期刊归一化要求；
与常规 WB 流程兼容，同膜完成总蛋白成像与目标蛋白检测；
定量更准确、线性范围更宽，数据更易通过审稿。
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更多全领域通用 WB 要求
未裁剪原图必须提交
除内参规范外，几乎所有生物、医学类顶刊已形成统一要求：投稿时必须提交未裁剪（uncropped）的 WB 原始膜图作为补充数据，严禁对图像进行随意裁切、拼接或过度修饰。这一要求旨在保障实验数据的可追溯性与可重复性，是当前顶刊审稿的核心核查点。
实验室需建立完善的数据留存机制，妥善保管原始图像、成像参数及完整实验记录，部分代表性出版集团与期刊的具体要求如下：
综上，面对近年来全面更新的 WB 投稿新规，科研人唯有及时调整实验操作规范，才能有效规避投稿风险。无论是做好内参蛋白的稳定性验证，还是选用 Stain-Free 总蛋白染色技术作为替代方案，亦或是严格留存未裁剪的原始实验图像，都是适配新规的关键举措。
为帮助科研人解决原图处理、数据存档、投稿规范适配等实际问题，伯乐生命科学特开通专家免费咨询通道，为科研人员提供一对一的专业指导，助力大家顺利通过审稿，让研究成果更快、更顺利地发表。
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内容策划：沈佳钰
内容审核：周育红
题图来源：图虫创意
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