巨噬细胞是一类位于外周血、炎症组织中的白细胞,属于免疫细胞中单核细胞类群,主要通过吞噬细菌、死亡细胞或细胞残片参与非特异性免疫调节,巨噬细胞将信号传递给其他淋巴细胞及其他免疫细胞参与特异性免疫调调节。

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巨噬细胞进入血液中以单核细胞前体形式存在,当单核细胞浸润到组织中,会分化成巨噬细胞,巨噬细胞主要存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝脏以及脾脏等组织中。巨噬细胞根据功能以及炎症分泌水平分为M1型和M2型巨噬细胞两种亚群。M1巨噬细胞主要由LPS及IFNγ激活,分泌IFN-γ、TNF-α等促炎症因子;M2巨噬细胞主要由IL4、IL13、M-CSF等激活,主要分泌IL10等抗炎症因子。

巨噬细胞的通常鉴定方式为流式细胞术或者免疫荧光实验,一般是通过一些巨噬细胞标志物进行的,常见的人和小鼠M1巨噬细胞标志物有CD68、CD80、CD86、CD32等;常见人和小鼠M2巨噬细胞标志物有CD206、CD204、CD163等。

这2种亚群的作用:①作为抗原提呈细胞;②杀伤肿瘤效应细胞;③巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的机制;④活化的巨噬细胞与肿瘤细胞结合后,通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞;⑤处理和呈递肿瘤抗原,激活T细胞以产生特异性抗肿瘤细胞免疫应答;⑥巨噬细胞表面上有FC受体,可通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞;⑦活化的巨噬细胞可分泌肿瘤坏死因子(TNF)等细胞毒性因子和产生超氧化代谢产物间接杀伤肿瘤细胞。

基础科学实验中使用的细胞巨噬细胞模型种类很多,来源不同种属不同需要的诱导因子的时长和浓度均不相同,后续的机制也有所差异;常使用细胞有小鼠RAW264.7巨噬细胞、人THP1单核细胞、小鼠BMDM骨髓细胞等;一般巨噬细胞研究主要使用人种属细胞系或者小鼠细胞系。而动物实验研究巨噬细胞的造模更多是偏向于炎症模型,例如急性肺损伤模型。下列给大家简单介绍。

(1)THP-1(人单核细胞)

THP-1是来自急性单核细胞白血病患者血液分离而来,在基础科研实验中,常常诱导分化为巨噬细胞来进行机制研究;THP-1通常受PMA(佛波酯)150nmol/L诱导24h即可分化为巨噬细胞,然后在PMA持续存在的情况下,LPS(100ng/ml)、IFNγ(20ng/ml)诱导48h,产生M1巨噬细胞;IL4(20ng/ml)、IL13(20ng/ml)诱导48h,产生M2巨噬细胞;

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(2)RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞)

RAW264.7细胞是主要炎症模型、巨噬细胞极化等体外研究细胞,广泛用于急性肺损伤、风湿性关节炎等模型中;LPS(200ng/ml),12h可以诱导此细胞向M1分化,产生炎症因子,10ng/ml IL-4诱导RAW264.7细胞12h可以产生M2细胞。

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