基因科技药企细胞培养过程中如何预防和解决污染问题？|培养液|基因科技|支原体|真菌|细胞培养|细菌|酵母菌

细胞污染是指细胞培养过程中，由于操作不慎或灭菌不彻底将细菌、霉菌或其他异物等带入细胞培养物中，对细胞的生存环境造成侵害的现象。20世纪自Moran和Schenerman 等人发现，悬浮培养的规模可以从3L放大到10000L，动物细胞培养的规模开始扩大，广泛地应用于抗体的制备或病毒疫苗的生产，但由于细胞培养自身有其环境敏感性和培养条件苛刻性等特性，如果受到外源性污染，将对生物制品研究或制品生产带来严重的危害。为了防止细胞培养过程中受到其他污染因素的影响，有必要了解细胞培养过程中污染来源、染菌种类等，建立起规范化的操作及防治策略，尽可能地保证细胞培养工序的稳定性及生产可靠性是有必要的。

细胞培养过程中染菌种类主要有哪些？
1.细菌污染
由于体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，污染较常见的有大肠杆菌、白色葡萄球菌、假单孢菌等。加用抗生素的培养液可预防和排除少量细菌的污染。一旦发生细菌污染，则很容易发现，多数情况下培养液短时间内变黄，表明有大量酸性物质产生，并出现明显浑浊现象；有时静置的培养液起初不混，但稍加震荡，就有许多浑浊物漂起。倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量圆球状颗粒物漂浮，有时在细胞表面及周围有大量细菌存在。有的培养液改变不明显而又疑似污染，也可按照现行版《中国兽药典》中关于无菌检测等方法判断。在规模化生产过程中，用革兰氏染色方法可以快速辨别染菌情况。

2.真菌污染
真菌的种类很多，污染的多是曲霉菌、白色念珠菌、酵母菌、黑霉菌、孢子菌等。真菌污染后多数在培养液中形成淡黄色或是白色的漂浮物，一般肉眼可见，较易被发现，但培养液仍是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37 ℃培养箱培养两三天仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，短期内培养液多不变浑浊。倒置显微镜下可以看见细胞之间有纵横交错穿行的丝状，树枝状或管状菌丝，并漂浮在培养液中。很多菌丝在高倍镜下可以看见链状排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圆形，散在细胞上及细胞周边生长。

3.支原体污染
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间（最小直径 0.2 μm）并独立生活的微生物，约有 1%可通过除菌滤器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性，并且国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，培养液一般会浑浊，细胞内的DNA、RNA 及蛋白表达发生改变，而细胞的生长率一般并未发生显著的影响，因而细胞被支原体污染一般难以察觉。

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