试剂盒的微孔板预先包被了针对小鼠 IgG 四种亚型（如 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3）的特异性抗原。当含有小鼠单克隆抗体的样本加入微孔板后，样本中的 IgG 亚型抗体就会与对应的包被抗原发生特异性结合。
这种结合是基于抗原和抗体之间的结构互补性。抗原和抗体的结合部位在空间结构上相互匹配，就像一把钥匙开一把锁一样。它们之间主要通过非共价键结合，包括静电引力、氢键、范德华力和疏水作用力等多种分子间作用力。例如，抗原分子表面的带电基团与抗体分子上带相反电荷的基团之间产生静电引力，促使它们相互靠近并结合。

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【样本要求】

样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清：4000rpm 条件下离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在-20℃以下，避免反复冻融。

2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000pm 条件下离心 20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。

3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在 4000rpm 条件下，离心 20 分钟取上

清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

样本保存和稳定性

样本在 2-8℃条件下，可以储存 72h，或者在- 20℃储存 6 个月。样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

试剂准备

1、使用前，所有的组分都要至少复温 120min，确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使

结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按 1:20 稀释，即 1 份的浓缩洗涤液，添加 19 份的蒸仅供科研使用，不得用于临床诊断。

3、底物：底物液 A 和 B，在使用前，按 1:1 体积充分混合，混合后 15 分钟内使用。

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操作程序

一、预包被板制备

1、用包被液将特异性抗原稀释到 2-5ug/ml（一般用 2ug/ml）浓度的包被工作液。

2、将包被工作液加入空白微孔板中，每孔 100uL。

3、室温放置过夜（12h）。

4、弃去包被工作液，在洁净卫生纸上拍干，每孔加入 150uL 封闭液。

5、37℃温育 120min。

6、弃去封闭液，在洁净卫生纸上拍干，放室温干燥 6h。

7、用自封袋收好预包被板，避免潮湿。