下游分化实验都计划好了，iPSC 却「罢工」了……
师弟
十万火急！后天就要做分化了，可 iPSC 传代以后一直贴不好
多大汇合度开始传代的？这次解离了多久？吹打到什么程度？
师兄
师弟
Emmm 差不多吧，我一般就凭感觉操作。
怎么能凭感觉做实验！我之前还遇到过iPSC 养着养着边缘就开始分化……这些问题一定要避免
师兄
诱导多能干细胞（iPSC）因具有自我更新和多向分化潜能，已成为干细胞研究及相关应用领域的重要研究工具。但想要稳定维持良好的细胞状态并不容易，培养过程中还常会遇到细胞团异常分化、增殖缓慢及定向分化不稳定等情况，影响实验进程和结果可靠性。那么，在培养过程中如何有效提前规避这些问题？出现异常后，又该如何快速定位原因并进行优化？尤其在神经定向分化研究中，哪些关键操作会直接影响诱导效率？
为了帮大家更顺利地开展干细胞研究，赛默飞联合丁香园将于 2026 年 9 月 10 日 14:00 开展线上主题研讨会《iPSC 实验全流程与关键技术：从重编程、培养扩增到定向分化》，本期研讨会将围绕 iPSC 重编程、培养与神经分化，从技术流程、常见问题到具体研究应用，进行系统讲解并给出解决方案。直播特别设置互动讨论环节，针对重编程、iPSC 培养中的常见问题（如传代方式选择、细胞增殖缓慢、自发分化等）、神经干细胞诱导分化等问题进行集中交流与答疑。机会难得，赶快报名参加吧！现在报名直播，除了有机会赢筋膜枪、盲盒摆件、赛家奇趣冰杯、京东卡等 100 份好礼，还能免费领取《干细胞研究实验手册》，主要针对 iPSC 培养与分化过程中的重难点，结合实际实验场景提供操作参考。
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精彩内容抢先看
一、iPSC 关键实验技术解析：iPS 重编程、培养扩增与定向分化
全面讲解不同重编程方法的选择与重编程操作流程，iPSC 状态判断和培养技巧，以及神经分化关键步骤与方案分享，帮助大家更好地把握从重编程、稳定培养到神经分化的完整实验路径。
二、技术研讨：Epi5 重编程 PBMCs、iPSCs 培养与分化中的常见问题与注意事项
重点讨论附加型载体重编程、不同传代方式选择、iPSC 增殖变慢和异常分化的原因及应对策略、培养体系切换，以及神经干细胞诱导分化等关键问题，从实际实验场景出发提供更具针对性的排查与优化思路。
手册内容抢先看
iPSC 的稳定培养，不仅取决于培养基和基质的选择，传代方式、培养体系切换以及日常操作细节，都可能影响细胞的贴壁恢复、扩增速度和未分化状态。
本次直播特别准备的干细胞研究专题手册，围绕培养与传代过程中常见的实验问题，梳理关键影响因素和排查思路，帮助研究者更快定位问题、优化培养条件，为获得稳定、高质量的 iPSC 提供实用参考。
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iPSC 传代后状态不佳，应该从哪些环节排查？
① 传代方式是否合适？
不同实验阶段对 iPSC 的传代方式并不相同。重编程建系早期通常采用机械分离、单克隆挑取；常规维持扩增多采用EDTA/Versene 解离后进行团块传代；而基因编辑、流式分选或部分定向分化实验，则可能需要将细胞解离为小细胞团或单细胞。
建议：根据实验目的选择合适的解离方式和传代试剂，常规维持培养中避免不必要的连续单细胞传代。
② 解离后的细胞状态是否合适？
团块过大、过小，或者为了获得单细胞而进行了不必要的过度解离，都可能影响传代后的恢复。尤其在需要单细胞传代时，对培养体系和细胞存活条件的要求更高。
建议：常规扩增优先维持合适大小的细胞团；确需单细胞操作时，可根据实验需求选择 Accutase 或 TrypLE 等解离试剂，并结合适合单细胞培养的支持体系，帮助改善传代后的细胞存活与恢复。
③ 培养基和基质是否正确配制和使用？
不同培养基对融化、预热方式和储存条件的要求并不相同；Geltrex Flex、Vitronectin 和 Laminin 521 等培养基质的稀释体系、包被条件也各有差异。任何一个环节出现偏差，都可能进一步影响细胞状态。
建议：严格按照对应培养体系的推荐条件进行培养基储存、复温以及基质稀释和包被，避免反复或长时间加热培养基，并关注基质包被及保存条件。
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iPSC 增殖变慢或出现异常分化，如何排查？
当 iPSC 出现生长速度下降、克隆形态改变或分化增加时，不妨从以下几个方面逐一排查：
培养体系是否发生变化？
刚复苏的细胞建议先复苏到冻存前使用的培养基和基质体系，待细胞状态恢复稳定后再进行体系切换；不同培养体系之间转换时，也应根据配方差异选择合适的切换方式，减少突然改变培养环境带来的影响。
是否及时换液和传代？
培养基更换不及时，或者细胞生长过密、错过合适的传代窗口，都可能影响 iPSC 的持续扩增和未分化状态。
是否存在污染？
除了容易观察到的细菌和真菌污染，也需要特别关注支原体。支原体感染早期往往没有明显表型，却可能改变细胞行为和代谢，因此建议定期进行相应检测。
如果已经出现分化，还能「救」回来吗？
需要根据分化程度采取不同策略。
对于少量、局部分化，可通过 EDTA 差异解离，或在显微镜下去除分化克隆，尽可能保留状态良好的未分化区域；如果分化比例进一步升高，可挑取未分化克隆重新扩增。
如果细胞整体状态已经明显下降，则应综合评估是否继续进行单克隆纯化，或直接复苏一支状态良好的冻存细胞重新培养。
更多 iPSC 培养与传代中的实操细节和排查思路，欢迎关注本次直播，一起聊聊如何让 iPSC 培养更加稳定、可重复。
内容策划：邹礼平
内容审核：吴军
题图来源：图虫创意
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