免疫荧光（IF）将抗体识别与荧光成像技术相结合，以直观观察固定细胞或组织样本中的靶标蛋白和其它生物分子。通过这一过程可以揭示靶标蛋白的定位、相对表达以及是否处于激活状态。IF 的强大之处在于能同时提供图像化，可量化的数据。

进行 IF 实验时，可以使用与荧光团偶联的一抗（直接检测）或使用未标记的一抗，然后使用荧光团偶联的二抗（间接检测）的两步法来检测感兴趣的蛋白质。通过任一种方法，用户都可以结合多种荧光基团（多重分析），使得 IF 成为研究蛋白共定位、亚细胞定位变化、细胞内蛋白的不同激活状态、识别不同的细胞亚群及开展其它分析的理想方法。

Cell Signaling Technology（CST）致力于提供既能生成强大特异性信号、同时又尽可能降低背景的高特异性抗体。我们的科学家筛选了大量的抗体，只推荐其中最适合相关应用的抗体。我们的验证工作包括完善的实验步骤优化和抗体浓度滴定，以确定每种抗体发挥作用的最佳条件。除此之外，我们的科学家还验证了各种辅助试剂，比如荧光基团偶联的二抗，以增强抗原检测并提高 IF 实验的效率。

本应用指南将重点阐述 IF 实验步骤中的关键步骤、介绍抗体性能和对照设计方面的重要概念，并提供支持性数据来论证我们提供的建议。

本指南中介绍的免疫荧光技术

技术

所需材料

可使用的 CST 实验步骤

IF-IC（免疫细胞化学）

培养的细胞系或原代细胞

IF 标准、IF 甲醇-固定、IF 甲醇-通透化

IF-F（冰冻）

冰冻组织

IF 标准品、IF 甲醇-通透化

mIHC（多重免疫组织化学）

福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的组织

mIHC（多重免疫组织化学）

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Cell Signaling Technology (CST) 是一家与众不同的生命科学公司，由活跃在科研一线的科学家创立、拥有并经营，秉承高标准的产品与服务质量、技术创新和科学严谨性。于1999年创立，总部位于美国马萨诸塞州丹弗斯，全球有600多名员工。我们始终如一地为全球的科学家提供高质量产品与服务，助力他们对科学发现的探求。CST坚持以人为本，以科学为本——是一家坚持服务客户，帮助社区，关爱地球的公司。

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