来源：市场资讯
（来源：近岸蛋白）
实验室里经常听到这样的对话：
“转染效率怎么样？看得见吗？”
“看不见啊，只能先筛克隆碰运气了……已经挑了三天了，眼都快花了。”
做基因敲入、构建报告细胞系的科研人都懂：最大的痛点不是技术本身，而是实验过程看不见——不知道转染有没有成功，不知道编辑效率有多高，不知道阳性细胞在哪里。
于是只能不断挑克隆、跑PCR、做测序验证。时间和精力花了不少，但结果往往像开盲盒。
有没有办法让基因编辑变得可见、可控、可预判？
答案是—带荧光标签的Cas9。
01
从“盲操”到“可视化编辑”
将EGFP直接融合在Cas9蛋白上，转染完成无需等待基因组整合，也无需额外引入荧光质粒。
在荧光显微镜下：
绿光细胞=成功转入RNP复合物的细胞。
更重要的是，EGFP荧光是瞬时产生的，电转后数小时即可通过流式细胞仪分选EGFP阳性细胞，高效富集真正摄入RNP的细胞群体。后续只需继续培养，让donor DNA自然整合，即可获得稳转株。相比传统的抗体筛选或者共转荧光质粒方案，整个流程更加直接、高效。
02
真实案例：构建TEAD-HiBiT报告细胞系
以Advanced Science发表的一项研究为例。临港实验室陆文超团队联合烟台大学药学院赵克浩团队及同济大学杨静团队开发了TEAD降解剂KG-FP-003。为了评估降解剂对不同TEAD亚型（TEAD1–4）的活性，团队需要构建稳定表达内源HiBiT标签的TEAD细胞系。
图例）论文Methods部分原文截图，可见研究团队采用NLS-Cas9-EGFP组装RNP复合物进行基因编辑。
（Adv. Sci. 2025）
研究中使用NLS‑Cas9‑EGFP Nuclease成功构建了HEK293T-HiBiT-KI-TEAD1、TEAD3、TEAD4细胞系。
在该策略中，研究人员采用了RNP电转方式：
01
EGFP-Cas9 +靶向TEAD的sgRNA+donor DNA组装RNP；
02
电转进入细胞；
03
利用Cas9自带的EGFP荧光快速识别并分选阳性细胞；
04
扩增培养后获得稳定Knock-in细胞系。
EGFP的作用看似简单，却极其关键——它让“阳性细胞富集”这一步从经验判断变成了可视化操作，大幅提升了后续筛选效率。
图例）基于NLS‑Cas9‑EGFP Nuclease构建的HiBiT‑TEAD1/3/4细胞中，KG‑FP‑003呈浓度依赖性降解TEAD蛋白。
（Adv. Sci. 2025, Fig. S4）
03
为什么选择NLS-Cas9-EGFP Nuclease
自带EGFP荧光：转染效率实时可见，流式分选进行阳性细胞富集；
双核定位信号（NLS）：促进Cas9高效入核，提高编辑效率；
RNP递送方案：DNA‑free，无基因组整合风险，脱靶率更低；
高纯度（≥95%）、低内毒素（<100 EU/mg）：适用于HEK293T、iPSC等敏感细胞。
04
适用场景
报告细胞系的构建；
内源标签敲入（HiBiT、GFP、mCherry等）；
药物降解剂或抑制剂的筛选；
需要流式富集阳性细胞的基因编辑项目。
基因编辑本身已经足够复杂。如果能让实验过程“看得见”，很多原本依赖运气和经验的步骤，都能变得更高效、更可控。NLS-Cas9-EGFP Nuclease或许不能让编辑效率瞬间翻倍，但它能帮你少挑几块板、少跑几次胶，也少熬几个筛克隆的夜。
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