中药入血成分鉴定如何做，有哪些问题需要注意？|中药|代谢物|大鼠|活性|血清

情景重现

经常有小伙伴问我们，中药入血成分鉴定相关的问题。本期我们再给大家汇报下，中药的含药血清制备以及后续做入血成分鉴定相关的问题和注意事项：

1.1实验动物的选择

采用正常动物或模型动物的血清均有，并且采用健康正常动物应尽量与模型动物一致。因此，选择健康动物还是模型动物需要进一步探讨。

1.2给药方案的选择

（1）给药剂量：若将含药血清看作一种药物，那么给药剂量取决于2 个方面：一是动物给药量，二是培养体系或反应体系中含药血清浓度。动物给药量换算公式为给药剂量＝人临床用量×动物等效剂量比值×培养液中血清稀释度，如果是做入血成分分析，可以适当提高给药剂量（5-10倍临床剂量换算）。

（2）给药、采血时间：目前有几种经验给药方案：1）7～10 d 给药法（每天 1 次，连续给药 7～10 d）；2）3 次给药法（连续 3 次，第 1、2 次间隔 20 h，第 2、3 次间隔 4 h）；3）2 次给药法（第 1 次给药后 2 h，再以相同剂量重复给药 1 次）等。采血时间一般在末次给药后 0.5～2 h，一般不超过 6 h，采血时间过早，部分药物组分未被吸收入血；采血时间过长，部分药物组分在体内发生转化或被排泄掉，理想的采血时间应落在药物达到稳态血药浓度期间。

1.3血清的处理

大部分研究人员对含药血清采用 56 ℃水浴加热 30 min的灭活方式，可以除去血清本身含有的补体等干扰实验的活性成分；也有研究人员将含药血清经乙醇、丙酮等有机试剂处理，通过使蛋白质变性去除血清中的酶、激素等，从而保留药物本身的作用。

具体可推文：《
2.中药含药血清制备及成分鉴定流程：

制备流程见下图：

2.1液相条件

采用配备ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm（内径）× 100 mm（长度）, 1.8 μm（粒径））（Waters Corp., MA, USA）反相色谱柱的Vanquish Flex UHPLC（Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA）超高效液相色谱进行色谱分离。流动相由A相（水+0.1%甲酸）和B相（乙腈）组成，洗脱梯度参见表3，流速为0.3 mL/min。色谱柱温度为40°C。进样量为6.0 µL。

2.2质谱条件

采用配备热电喷雾离子源的四极杆轨道离子阱质谱仪（Q Exactive™, Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA）进行质谱分析。正、负离子的离子源电压分别为3.7 kV和3.5 kV；毛细管加热温度为320°C；鞘气压力为30 psi，辅助气压力为10 psi；溶剂加热蒸发温度为300°C；鞘气和辅助气均为氮气；碰撞气为氮气，压力为1.5 mTorr。采用Full scan/dd-MS2模式采集数据，Full scan参数：分辨率70000，自动增益控制目标1×106，最大隔离时间50 ms，质荷比扫描范围100 – 1500；dd-MS2参数：分辨率17500，自动增益控制目标1×105，最大隔离时间50 ms，质量分离窗口2，碰撞能10 V、30 V、60 V，强度限定1×105。

2.3数据分析

采用Progenesis QI 3.0软件（Waters Corp., MA, USA）处理采集的质谱数据，步骤依次为导入原始数据、峰提取、去卷积。搜索对照品数据库（TCM Pro 2.0）和理论数据库（通过文献、公共数据库等构建），通过对照品保留时间误差、母离子质量误差、二级碎片匹配、同位素分布、峰强度等对鉴定结果进行多维综合判断分析，得到最终结果。

2.4 结果案例