图1：使用Prime 95B拍摄的突触传递荧光图像。目的是测量DRG神经元中SypHy(黄色)的突触传递，这些神经元同时转染了CAPS2-Halo(品红色)。只有部分SypHy阳性的神经突起也表达CAPS2-Halo，从而大幅减少了可测量的突触数量。箭头指向视野中所有活跃的突触，但只有表达CAPS2-Halo的突触才能用于分析(实心箭头)。采集设置：100毫秒曝光，100倍物镜，像素尺寸110纳米。
背景
Ute Becherer博士利用多种不同的模型系统研究胞吐作用和胞吞作用的调节机制，包括肾上腺素能细胞(神经内分泌细胞)中含有肾上腺素的囊泡释放、神经元中的突触传递以及免疫细胞毒性T细胞的机制。参与调节胞吐作用的蛋白质也存在于T细胞中，深入了解胞吐作用背后的过程对整个生物体具有重要意义。Becherer博士正在从分子尺度到整个活体动物层面研究这种胞吐作用。
成像技术在这些实验中发挥着重要作用，Becherer博士使用了超分辨率显微镜、全内反射荧光显微镜、共聚焦显微镜和宽场成像技术。正如Becherer博士所言，后者应用于神经元细胞，“我们正在研究一种名为CAPS的蛋白质，它在疼痛产生中发挥作用，我们通过宽场成像观察背根神经节(DRG)感觉神经元中的这一过程。”
挑战
由于这些实验涉及多种不同的成像技术，所使用的任何探测器都需要具备灵活性和广泛的适用性。例如，用于TIRF系统的探测器需要具备高灵敏度和快速响应能力。对细胞群进行宽场和共聚焦成像时，需要较大的视野(FOV)，以便尽可能多地捕捉细胞并观察尽可能多的胞吐事件。Becherer博士提到，这些细胞中只有一部分被成功转染，而更大的视野则能提供更大的样本量。
其中一些系统此前使用的是EMCCD，但为了测量T细胞的胞吐作用或神经元突触传递，需要更大的视野(FOV)以便同时测量大量事件。此外，Becherer博士表示：“为了真正分辨出事件并观察囊泡的大小，我们需要更小的像素尺寸，而EMCCD的像素比现在Prime 95B的像素大得多。”
Prime 95B 的一大优势是其宽广的视场角，另一个优点是像素尺寸，两者结合带来了理想的感光度。——Ute Becherer 博士
解决方案
Becherer博士目前正在使用Prime 95B sCMOS进行成像实验，利用其高灵敏度和大视野，以及由于11 μm较小像素尺寸带来的优于EMCCD的改进分辨率。Prime 95B提供的极广视野极大地促进了突触传递的荧光成像。
通过将Prime 95B的大视野与iLAS TIRF系统相结合(该系统可实现比传统TIRF更广视野的成像)，开发出了一套强大的大视野成像系统。
贝克雷尔博士还表示：“我也体验到了出色的客户支持，通过PCI设置Prime 95B非常简单。我们还升级了固态硬盘和更多内存，以便进行长时间的数据采集和数据收集。”
热门跟贴