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一、从成熟tRNA到功能性小RNA

tRNA不仅是连接密码子与氨基酸的“翻译适配器”，也是细胞应激反应和基因表达调控的重要参与者。

成熟tRNA的表达、氨酰化状态及其来源小RNA片段，分别反映翻译系统的不同层面。仅分析其中一类，往往难以完整解释tRNA变化与蛋白质合成之间的关系。

新使生物NeoRibo提供全景tRNA-seq、charged tRNA-seq及tsRNA-seq服务，从成熟tRNA丰度、氨酰化状态到tRNA来源小RNA，系统解析tRNA代谢及其介导的翻译调控机制。

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图1｜全景tRNA-seq与tsRNA-seq联合应用示意图

二、全景tRNA-seq：解析成熟tRNA表达图谱

tRNA具有长度短、二级结构稳定、修饰丰富以及不同家族序列高度相似等特点，常规RNA-seq难以对其进行有效反转录和准确定量。

全景tRNA-seq针对tRNA的结构与修饰特点进行优化，能够更加全面地检测不同tRNA家族及异受体的表达，构建高质量的成熟tRNA表达图谱。

可以回答哪些问题？

· 不同处理或疾病状态下，哪些tRNA发生差异表达？

· 不同氨基酸对应的tRNA供给是否发生重塑？

· tRNA变化是否与密码子使用偏好相匹配？

· 特定tRNA是否参与细胞增殖分化、应激或疾病发生？

· tRNA表达改变是否可能影响翻译速度与蛋白质合成？

新使生物全景tRNA-seq优势

· 针对tRNA复杂结构及丰富修饰进行建库优化

· 提升成熟tRNA的反转录与捕获效率

· tRNA全长率极高，准确呈现成熟tRNA表达图谱

· 覆盖多种tRNA家族及异构体

· 敏检测核基因组、线粒体及叶绿体来源tRNA

· 适用于动物、植物、微生物等多种样本

三、charged tRNA-seq：检测tRNA氨酰化状态

tRNA表达量并不完全等同于其实际参与翻译的能力。成熟tRNA需要在氨酰-tRNA合成酶的作用下连接相应氨基酸，形成氨酰化tRNA（charged tRNA），才能将氨基酸递送至核糖体并参与肽链延伸。

因此，在全景tRNA-seq的基础上进一步检测tRNA的氨酰化水平，可以更加直接地反映细胞内可用于翻译的tRNA状态。

charged tRNA-seq可以揭示

· 不同tRNA的氨酰化比例

· 氨基酸供应变化对tRNA charging的影响

· 营养缺乏或细胞应激下的tRNA氨酰化重塑

· tRNA表达量与实际氨酰化状态是否一致

· tRNA charging变化与核糖体停滞、翻译速度之间的关系

核心区别全景tRNA-seq回答“有多少tRNA”，charged tRNA-seq进一步回答“其中有多少处于参与翻译的氨酰化状态的tRNA”。

点击图片查看tRNA-seq技术详细介绍

四、tsRNA-seq：捕获tRNA来源的功能性小RNA

tRNA可在特定核酸酶作用下被加工或切割，形成一系列tRNA来源小RNA，统称为tsRNA（tRNA-derived small RNA）。这些片段并非简单的tRNA降解产物，而是可参与翻译调控和应激响应的功能性分子。

tsRNA的主要类型

1. tRF（tRNA-derived fragment）：由成熟tRNA或前体tRNA特定区域产生的短片段。

2. tiRNA（tRNA halves）：通常由成熟tRNA在反密码子环附近切割产生的tRNA半分子。
tsRNA的重要性

越来越多研究表明，tsRNA可参与翻译抑制、应激颗粒形成、RNA稳定性调控、基因沉默及细胞间通讯，并与肿瘤、代谢疾病、神经系统疾病和免疫调控密切相关。

为什么需要专门的tsRNA-seq？

常规小RNA-seq在接头连接、反转录及片段筛选过程中，容易受到tRNA复杂二级结构和丰富修饰的影响，导致部分tsRNA难以被有效捕获，产生明显的检测偏倚。

因此，tRNA来源小RNA需要采用更具针对性的建库和分析策略，对RNA末端、修饰干扰及片段长度筛选等关键环节进行优化，从而提高tRF、tiRNA等片段的捕获效率与检出率，更加全面、准确地呈现tsRNA表达图谱。

新使生物tsRNA-seq优势

新使生物tsRNA-seq针对tRNA来源小RNA进行方法改进，可提供：

· 高度完善的tsRNA表达图谱

· 开展tRF、tiRNA等片段的分类与定量

· 分析tsRNA长度分布

· 定位片段在前体或成熟tRNA上的来源区域

· 筛选差异表达tsRNA

· 挖掘疾病相关标志物及潜在调控分子

五、为什么要将全景tRNA-seq与tsRNA-seq联合？

成熟tRNA与tsRNA并不是两个相互独立的体系。tRNA的表达、修饰、氨酰化和切割过程彼此关联。

某类tsRNA水平升高，可能来自对应成熟tRNA表达增加，也可能源于tRNA切割增强；反过来，tRNA的大量切割还可能降低可用于翻译的成熟tRNA数量，进一步影响密码子解码和蛋白质合成。

联合分析能够区分不同tRNA变化来源，避免仅凭单一数据推测机制。

单独检测与联合检测的区别

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六、构建完整的tRNA调控证据链

通过全景tRNA-seq、charged tRNA-seq和tsRNA-seq联合分析，可以同时覆盖tRNA的“翻译适配器”功能与“小RNA调控分子”功能，建立更加完整的研究路径。

翻译适配器路径：成熟tRNA表达变化 → tRNA氨酰化状态改变 → 密码子解码能力与翻译速度变化 → 核糖体停滞或蛋白质合成改变

小RNA调控路径：tRNA加工或切割增强 → tRF、tiRNA等tsRNA积累 → 参与翻译抑制、RNA稳定性及应激调控

七、推荐应用方向

1｜细胞应激与翻译抑制

研究氧化应激、缺氧、营养缺乏、病毒感染等条件下，tRNA氨酰化、切割及tsRNA生成与整体翻译变化之间的关系。

2｜肿瘤与代谢疾病

筛选异常表达的tRNA和tsRNA，解析其对密码子偏好、蛋白质合成及肿瘤适应性翻译的影响。

3｜生殖发育与细胞分化

研究胚胎发育、配子发生及干细胞分化过程中tRNA供给、氨酰化和tsRNA表达的动态重塑。

4｜神经系统与衰老研究

探索tRNA代谢异常、tRNA切割及tsRNA积累与神经退行性疾病、细胞衰老之间的关系。

5｜植物逆境与微生物适应

解析植物或微生物在高温、盐胁迫、干旱、营养变化等条件下的tRNA响应及翻译适应机制。

6｜生物标志物筛选

利用tsRNA稳定、片段特异性强等特点，在组织、血液或其他体液样本中筛选潜在疾病标志物。

八、进一步联合超高分辨率Ribo-seq

如果希望将tRNA变化与真实翻译结果直接关联，还可以进一步联合超高分辨率Ribo-seq检测密码子使用情况、核糖体停滞与翻译效率变化。

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点击图片查看Ribo-seq × tRNA-seq联合应用详细介绍

完整证据链：tRNA表达与氨酰化变化 → tsRNA生成 → 密码子解码改变 → 核糖体停滞或翻译速度变化 → 蛋白质表达改变

新使生物专业翻译组学技术平台

新使生物NeoRibo长期专注于翻译组学技术研发与应用，已构建覆盖核糖体翻译、tRNA解码、RNA修饰及Poly(A)尾调控等多个层面的技术体系，提供从整体翻译活性、基因翻译效率到密码子分辨率翻译行为的系统解决方案，全面解析转录后及翻译过程中的精细调控机制。

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