在2023年欧洲肝脏年会上(EASL2023),研究人员描述了临床阶段的生物技术公司(Precision BioSciences)研发的慢乙肝基因编辑疗法的最新临床前开发数据。
该临床前研究指,慢性乙型肝炎基因编辑方法:用序列特异性ARCUS核酸酶靶向cccDNA和整合的病毒基因组,在体内清除乙型肝炎病毒。ARCUS核酸酶可用于识别乙型肝炎病毒(HBV)基因组中的保守DNA序列,并为慢性乙型肝炎(CHB)治疗提供一种策略。
CHB的持续存在归因于肝内病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)池的维持及整合后HBV的免疫抑制性乙肝表面抗原(HBsAg)的表达。目前疗法对cccDNA或整合病毒的HBsAg的表达没有直接影响。在肝细胞中表达的ARCUS核酸酶可同时切割cccDNA和整合的病毒基因组,从而去除cccDNA并抑制病毒基因的表达。
本届欧肝会上,研究人员描述了一种潜在治疗CHB方法,该方法使用一种高度特异性工程化ARCUS核酸酶(ARCUS- POL)靶向HBV基因组。通过反复几轮的蛋白工程,ARCUS-POL核酸酶被优化为具有高水平的靶向编辑能力及最小的脱靶活性。
然后在感染了HBV的原代人肝细胞(PHHs)和整合了部分HBV基因组的HepG2细胞系中进行了体外药效和特异性测试。为了在体内评估ARCUS-POL,开发了新型外显子腺相关病毒(AAV)小鼠和非人灵长类动物(NHP)模型,其中含有作为cccDNA替代物的部分HBV基因组。通过全身给药含有ARCUS-POL mRNA的脂质纳米颗粒(LNPs)实现了临床相关递送。
ARCUS基因编辑使cccDNA和整合的HBV失活以驱动持久的抗原丢失,来源EASL2023、Precision Bio
结果表明,将ARCUS-POL mRNA转染到HBV感染的PHHs中,可使cccDNA和HBsAg减少75%以上。重要的是,ARCUS-POL在PHHs中没有产生可检测到的易位,使用杂交捕获后进行长读测序。将ARCUS-POL瞬时递送至含有整合HBV DNA的细胞后,实现了靶向编辑率>80%,随后HBsAg降低。在小鼠和NHP AAV模型中,LNP递送ARCUS-POL mRNA后,观察到AAV总拷贝数显著减少,on-target在靶率很高。在支持HBsAg表达的小鼠模型中,循环表面抗原持久减少了96%。
研究结论:RCUS-Pol核酸酶能够消除cccDNA并降低整合HBV的HBsAg表达,而不会诱导易位。这些数据支持一种潜在的基因编辑方法和治愈CHB。
小番健康结语:以上是在本届欧洲肝脏大会上,研究人员介绍了使用在研乙肝新药PBGENE-HBV,在临床前开发的最新进展,即对乙肝血清抗原及cccDNA的抗病毒活性均很高,且持续下降的积极数据,支持PBGENE-HBV的继续开发和提交CTA/IND申请。
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