您知道吗,如果只是简单地遵从接下来这些技巧,您移液的准确性和重复性将可能会得到5%的提高。
1、装吸头
移液器套柄用力下压,需要时小幅度旋转即可。
错误操作:用力敲击吸头。此方法会带来吸头损坏甚至移液器套柄磨损,从而影响其密封性。
2、量程设定
大多数移液器的正常操作体积范围是指示量程的(10-100)%。尽管这一范围是可操作范围,但随着体积设定的下降性能参数将会发生变化。100uL移液器的准确性参数在指示量程的50-100%的时为±0.8%。然而如果你移取10μL(或者指示量程的10%),不准确度将会提高3倍,或者为(2.5-3)%。所以获得最佳性能的最优量程范围是指示量程的35-100%。尽量避免将一个移液器的体积设定少于最大体积的10%,而应该用小量程的移液器来进行小体积移液操作。
量程调节:当由小量程调节至大量程时,朝所需量程方向连贯旋转,旋转到达超过所需量程1/3圈处再回调至所需量程。当由大量程调节至小量程时,直接连贯旋转至所需量程。
3、润洗
用同一样品重复吸液排液二至三次,润洗为以后每次吸液提供相同的接触面,保证操作的一致性。
注意:高温或者低温液体请不要润洗!
4、吸头浸入角度
吸液时吸头尽可能以90度角浸入到样品中,最好不要偏离垂直位置超过20°对于微量体积的移液器,以垂直角度移取溶液可以提高2.5%的准确性。偏离垂直超过20°吸液将会导致不准确的量取-过多的液体将会被吸入,造成移液不准确。以60度角浸入,将会使你的液体吸取量超过所设定的0.7%。
5、吸头浸入深度
正确的吸头浸入深度可以提高准确性高达5%,尤其对微量移液器相当重要。对于微量移液器,吸头应该浸入(1-2)mm,而对于大量程的移液器,浸入深度应为(6-10)mm。如果吸头浸入的太深,吸头内部的空气就会被压缩,造成过多的液体被吸入。残留在吸头表面的液体也可能会影响结果。吸头如果浸入的不够充分,那么可能会吸入空气,就会造成气泡的形成和移取体积不准。两者都会造成不准确的移液体积,
6、吸头浸入时间
吸液后在液面中保持一秒钟再将吸头平缓移开,这对于大容量移液器或者吸取粘性样品尤为重要。
7、吸液速度
匀速连贯移液,控制好移液速度,太快会造成喷液,液体或者气雾冲入移液器内部,污染活塞等部件。
8、排液及吹液
保持一致性
先将活塞按至第一档排液,略作停顿后按至第二档进行吹液。
保持一致的移液节奏和速度将会帮助你得到理想的、重复性更高的结果。保持节奏和速度的一致性可以将准确性提高5%。
排液四种方式:
9、温度变化
避免温度变化
恒定的室温:移液和校准的理想温度是21.5℃±1℃。避免在有风或者有阳光直射,温度变化较大的区域操作,这些区域可能会降低移液的精准度。保证足够的平衡时间:除非另有其他要求,否则请保证足够的时间来使您的液体样品和移液器达到平衡温度。
手温效应长时间使用移液器,来自手的热量可能会加热移液器一导致移液器内部的空气受热膨胀从而会产生不准确的结果。
所以移液器不宜长时间握在手里,不用时最好将其挂在支架上或者挂在手上晾一下。
10、润洗
注意区分润洗吸头和不适合润洗的情况
润洗吸头2-3次可以在吸头内形成同质膜,这样可以提高0.2%的准确度性。润洗可以中和微量移液中的毛细效应,对于大体积移液,这可以使吸头内部温度与样品温度一致。当移取热的和冷的溶液时润洗会对结果产生不利影响,如从冰浴中移液或者溶液温度超过37摄氏度,润洗可能会造成高达5%的错误率。
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