中药血清药物化学是指将中药或中药复方经口给动物灌服一定时间后采集动物血液、分离血清，对含药血清中的化学成分进行分离鉴定和定量分析，从而确定中药的有效成分及其代谢产物，为中药血清药理学提供化学依据，是中药药效物质基础研究的重要手段之一。

那么，如何来制备中药的含药血清，中药材或中药复方用量、实验动物、采血时间等如何选择？我们本次将含药血清制备问题及注意事项进行汇总，向大家汇报：

1.实验动物的选择

一般来说，大鼠和小鼠是最常用的实验动物，此外，正常动物或模型动物的血清均可采用，并且采用健康正常动物应尽量与模型动物一致。

若未指定动物模型，为了保证血清质量及用量，我们通常选择健康雄性SD大鼠进行血清收集。（一般设置3~6只大鼠作为空白对照，3~6只大鼠进行给药）

2.给药剂量及给药次数

2.1.给药剂量：动物的给药剂量，一般参照人体临床用量，按照动物等效剂量比值进行换算（也可根据中药的量效关系进行摸索）。

动物给药量换算公式为给药剂量＝人临床用量×动物等效剂量比值×培养液中血清稀释度。

以黄连汤为例，黄连汤复方组成（黄连15克、甘草15克（炙）、干姜15克、桂枝15克、人参10克、半夏15克、大枣15克，一剂一天，共100克/天）。使用大鼠进行实验，动物给药剂量换算为=100g/70kg×6.3=9 g/kg。

2.2 给药次数

我们一般采取5~7天给药法（每天1次，连续给药5~7天），多次给药能够提高含药血清中有效成分的浓度。

3.中药材或中药复方用量选择：

含药血清制备实验中，中药材及中药复方的用量主要依据实际动物给药剂量及给药次数计算得到。

同样以黄连汤为例，设计给药组3只大鼠进行给药，给药剂量为9 g/kg/d，大鼠的给药体积一般为1mL/100g，计算得到最终给药浓度为0.9g/mL（100g），采取5~7天给药法，以7天为例，大鼠重量以200g为例，最终计算得到需要的中药材或中药复方质量为2×3×7=42 g，实际由于药材提取、储存等原因，且如果是做入血成分分析，可以适当提高给药剂量（5-10倍临床剂量换算），所以我们一般建议预先需要准备4附中药材或中药复方（一附为人一天药材用量）进行含药血清制备。

4.采血时间及方法

针对采血时间，我们一般有两种方式：①选择在末次给药后1~2 h进行采血，根据多次实验经验，在末次给药后1~2 h内，药物有效成分能够较好地吸收入血。②选择在末次给药后1、2、4、6 h时间点分别采血0.5 mL，最后将所得血清混合，这种取血方式使各时段药物有效成分均能被收集，避免了因采血时间的因素对药物有效成分的影响。

血液的采集，一般采用动脉穿刺法、颈静脉穿刺法或心脏穿刺法，应尽量避免血液的溶血和凝固，以免影响血清的质量。（以大鼠为例，我们一般使用3%戊巴比妥钠0.2ml/100g麻醉后，进行心脏穿刺法取血。）

5.血清处理

收集血液后，3000 rpm，4 ℃，离心10 min，分离血清。大部分研究人员对含药血清采用56℃水浴加热30 min的灭活方式，可以除去血清本身含有的补体等干扰实验的活性成分；也有研究人员将含药血清经乙醇、丙酮等有机试剂处理，通过使蛋白质变性去除血清中的酶、激素等，从而保留药物本身的作用。

血清一般状态下是略偏黄色，如果变红那可能就是有点溶血，但是轻微溶血对于成分鉴定和细胞实验是没有影响的。

6.血清储存

血液采集后，建议尽快离心将血清分离出来，不建议血浆在室温放置过长时间，分离得到的血清在4℃冰箱中只能短暂保存，建议储存时间不要超过24 h，为防止血清中有效成分变化，建议储存于-20℃冰箱中不宜超过3个月，需要长期保存的血清建议储存于-80℃低温冰箱中。

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