品名:PE-Cy7 Tandem,PE-Cy7串联染料
用途:科研
一、基本描述
PE-Cy7是一种广泛应用于流式细胞术和荧光成像的串联染料(Tandem Dye),由藻红蛋白(Phycoerythrin, PE)和氰ine 7(Cy7)两个荧光基团通过共价连接形成。PE作为激发染料,能够吸收激光能量后将能量通过共振能量转移(FRET)传递给Cy7,从而发出远红光荧光信号。PE-Cy7的激发波长一般为488 nm或561 nm,发射峰位于约780 nm波段,具有较长的波长和较低的背景噪声,适合多色流式分析中远红光通道的检测。该染料具有亮度高、光谱重叠小、信号强等优点,是多色荧光标记的重要选择。
二、化学性质
分子结构:PE-Cy7串联染料包含大分子蛋白质PE与小分子荧光染料Cy7通过稳定的共价键偶联而成。PE是一种高度水溶性的蛋白质,Cy7为光谱在近红外区域发射的荧光染料。
溶解性:PE-Cy7水溶性良好,常溶于PBS或流式细胞术缓冲液。
稳定性:PE-Cy7对光敏感,易被强光照射导致荧光淬灭,需避光保存;在4°C条件下稳定性较好,冷藏保存可维持数月。
荧光特性:激发波长488/561 nm,发射波长约780 nm,发射峰宽且强度高。
pH适应性:适应中性至弱碱性环境,极端pH条件下可能影响荧光性能。
三、制备方法
PE-Cy7染料的制备通常采用化学偶联反应,将PE蛋白上的氨基或巯基与活化的Cy7染料基团连接。
首先纯化高纯度的PE蛋白,确保其生物活性和荧光性能。
Cy7染料经活化处理,通常以NHS酯形式存在,便于与PE上的氨基形成稳定的酰胺键。
在适宜的缓冲体系中(pH 7.4–8.0),将PE和Cy7-NHS按照一定摩尔比混合反应,控制偶联程度,避免过度标记引起自发淬灭。
反应结束后通过透析或凝胶过滤去除游离染料,纯化得到高质量PE-Cy7串联染料。
进一步检测荧光特性和结合活性,确保批次间稳定性。
以上资料由西安齐岳生物小编whl提供,仅用于科研
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