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产品名称：AF568 alkyne, 5-isomer；AF568炔烃衍生物的反应条件优化关键点
1. 核心反应特性与机制
生物正交点击反应：AF568 alkyne（5-异构体）通过炔基（-C≡C）与叠氮基团（-N₃）发生铜催化叠氮-炔环加成（CuAAC），生成稳定三唑环结构。反应速率常数达10³-10⁴ M⁻¹·s⁻¹，可在水相/有机相快速完成（室温下1-2小时），适合低浓度标记。
荧光特性：激发波长578 nm，发射波长603 nm（橙红色荧光），量子产率0.65-0.9，光稳定性良好（连续激发1小时荧光保留率＞80%），pH 4-10范围内荧光强度稳定，适合复杂生物样本成像。
5-异构体优势：短链连接降低空间位阻，适合标记大分子（如抗体-抗原复合物）；磺酸基团增强水溶性，减少非特异性结合，提升信噪比。
2. 反应条件优化关键点
（1）反应介质与pH控制
缓冲体系：首选0.1 M碳酸氢钠缓冲液（pH 8.3-8.5），避免含伯胺的Tris-HCl（防止竞争反应）。多肽标记可选用pH 7.5缓冲液以优先标记N末端氨基。
溶剂选择：溶于DMSO、DMF、DCM等有机溶剂及水，水溶液需即时使用，避免反复冻融；有机溶剂比例≤10%以减少副反应。
（2）温度与时间优化
温度：室温（20-25℃）反应1-4小时，或4℃过夜以减少降解风险。高温（＞30℃）易导致炔烃降解或荧光淬灭。
时间控制：蛋白质/抗体标记通常需2-4小时，核酸/多肽可缩短至1-2小时，需通过紫外光谱监测反应进程。
（3）浓度与摩尔比
摩尔比：AF568 alkyne与目标分子（如抗体）的摩尔比为5:1至20:1（如1 mg抗体对应5-20 μL 10 mM染料溶液），确保高效标记且避免过度修饰导致活性丧失。
浓度范围：染料浓度1-10 mg/mL，生物分子浓度2-5 mg/mL，避免高浓度导致自聚或沉淀。
（4）纯化与后处理
纯化方法：反应后通过透析、Sephadex G-25凝胶过滤或尺寸排阻色谱去除游离染料，确保产物纯度＞95%。
淬灭与验证：加入10%体积的1 M Tris-HCl（pH 7.4）淬灭未反应NHS酯；通过紫外-可见光谱（BHQ-3在618 nm吸光度，蛋白质在280 nm吸光度）计算标记度（DOL），确保标记效率。
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