蛋白质作为生命活动中最重要的物质基础之一，其纯度直接影响其在生物医学、药物研发及临床诊断中的应用效果。准确评估蛋白质纯度不仅是质量控制的核心环节，也为后续的功能研究与产品开发提供可靠依据。目前，蛋白纯度分析方法多样，涵盖从传统电泳到现代质谱等多种技术，各有其适用场景与优势局限。本文将系统梳理常用蛋白纯度分析方法原理与特点。

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蛋白纯度分析

传统染色与比色法

包括双缩脲法、Lowry法、BCA法及考马斯亮蓝法（Bradford法）。这些方法基于蛋白质与特定试剂发生显色反应，通过比色测定吸光度来推算蛋白浓度，进而间接反映样品纯度。

原理：双缩脲法利用碱性条件下蛋白质与Cu²⁺形成紫红色络合物；Lowry法在此基础上引入Folin-酚试剂增强灵敏度；BCA法则基于Cu⁺与BCA试剂形成紫色复合物；考马斯亮蓝法则依赖染料G-250与蛋白质结合后吸收峰偏移至595nm。

优点：操作简便、成本低、无需复杂仪器，适用于快速筛查与常规实验室检测。

缺点：易受样品中干扰物质（如去垢剂、还原剂、脂类等）影响，准确度与特异性有限，无法区分不同蛋白质组分。

传统染色与比色法

以聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及其衍生技术为代表，包括SDS-PAGE、非还原性电泳、双向电泳（2-DE）等。

原理：基于蛋白质在电场中依电荷、分子量及构象差异进行分离。SDS-PAGE通过SDS使蛋白质带负电荷并线性化，实现按分子量分离。

优点：分辨率较高，可直观显示蛋白质条带与杂质，兼具定性（分子量判断）与半定量（灰度分析）功能。

缺点：定量精度有限，染色方法（如考染、银染）的灵敏度与线性范围影响结果准确性，且操作流程较长。

色谱与质谱联用法

包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱-质谱（GC-MS）及同位素稀释质谱（IDMS）等。

原理：色谱技术基于蛋白质在固定相与流动相间分配差异实现分离；质谱法则通过质荷比进行精确鉴定与定量。

优点：灵敏度高、特异性强、可进行绝对定量，适用于复杂体系与痕量杂质检测。

缺点：仪器昂贵、操作复杂、对样品前处理要求高，通常需专业技术人员操作。

总结与展望

蛋白纯度分析技术的发展体现了从定性到定量、从低通量到高精度的演进脉络。传统方法如SDS-PAGE在快速筛查与直观分析中仍不可替代，而现代质谱技术则为高精度定值与杂质鉴定提供了强大工具。未来，多技术联用（如电泳-质谱联用）与标准化数据分析流程的建立，将进一步推动蛋白纯度分析向更高灵敏度、更高通量与更好重复性方向发展，为生物医药研究与产业化提供坚实支撑。

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