2026年7月28日，空军军医大学西京医院药剂科王婧雯、高凯团队，联合西京医院肝胆外科等单位，在Phytomedicine （中科院1区，IF=11.3，TOP期刊）发表题为“Wedelolactone targets SORBS1 to regulate glycolipid metabolism and suppress inflammation, thereby alleviating diet-induced MASH via multiple pathways”的研究论文。该文于2026年3月2日投稿，2026年7月15日修回，2026年7月26日接收。
代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（metabolic dysfunction-associated steatohepatitis，MASH）是代谢功能障碍相关脂肪性肝病（metabolic dysfunction-associated fatty liver disease，MASLD）的进展阶段，核心病理特征包括肝脏脂质沉积、炎症和纤维化，部分患者可进一步进展为肝硬化和肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。该研究聚焦天然产物蟛蜞菊内酯（wedelolactone，WED），系统评估其在饮食诱导MASH中的治疗作用，并通过蛋白质芯片、SPR、CETSA、分子对接、分子动力学模拟、转录组学、细胞功能实验和AAV8介导的体内基因敲低实验，鉴定并验证SORBS1是WED发挥抗MASH作用的直接靶点。
研究结果显示，WED可直接结合并激活Sorbin和SH3结构域蛋白1（Sorbin and SH3 Domain Containing 1，SORBS1），关键结合位点涉及VAL32和HIS47。机制上，WED通过SORBS1调控CBL/TC10/GLUT4轴，改善糖脂代谢和胰岛素敏感性，同时抑制TNF信号通路相关炎症反应，从而减轻肝脏脂质沉积、炎症损伤和纤维化进展。更重要的是，敲低SORBS1会加重MASH病理过程，并几乎完全消除WED的治疗效应，提示SORBS1是WED发挥抗MASH作用的关键功能靶点。
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【摘 要】
背景：代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）的致病机制高度复杂，涉及多种病理环节，目前已被证实可有效用于临床的药物治疗选择仍然有限。尽管天然产物蟛蜞菊内酯（WED）显示出潜在肝保护作用，但其在MASH中的治疗效应及其潜在机制仍未得到充分阐明。
目的：本研究旨在探讨WED改善饮食诱导MASH的治疗作用，并进一步阐明其直接分子靶点和潜在机制。
方法：为评估WED在MASH中的治疗潜力，研究者首先使用棕榈酸（palmitic acid，PA）和油酸（oleic acid，OA）处理HepG2细胞和小鼠原代肝细胞，建立体外脂质积累和炎症反应模型，并评价WED的体外作用。随后，研究采用蛋氨酸-胆碱缺乏（methionine-choline-deficient，MCD）饮食和高脂/高胆固醇（high-fat/high-cholesterol，HFHC）饮食诱导的小鼠MASH模型，评估WED的体内治疗效果。为识别其分子靶点，研究者合成了生物素标记的WED探针，并使用人源蛋白质组芯片筛选潜在直接结合蛋白；随后通过表面等离子体共振（surface plasmon resonance，SPR）和细胞热转移实验（cellular thermal shift assay，CETSA）验证结合亲和力。研究还结合分子动力学（molecular dynamics，MD）模拟和分子对接，确定WED与靶蛋白之间的关键相互作用位点；并整合转录组学和生物信息学分析，阐明WED通过这些靶点调控的下游信号通路。最后，研究通过生物学功能实验验证WED作用机制。
结果：本研究证明，WED可通过直接靶向SORBS1发挥显著抗MASH作用，其结合位点涉及SORBS1的VAL32和HIS47残基。机制上，WED直接结合并激活SORBS1，从而多层面调控下游信号通路。具体而言，WED可调节肝组织中SORBS1表达，通过CBL/TC10/GLUT4轴改善糖脂代谢，并抑制TNF-α和IL-6等促炎细胞因子。上述协调作用最终有效缓解肝脏脂质积累、炎症和纤维化。此外，抑制SORBS1会加重MASH进程，并完全消除WED的治疗效果，从而确认SORBS1是WED发挥治疗作用的关键靶点。
结论：本研究揭示，WED可通过直接结合SORBS1，改善胰岛素抵抗并抑制肝脏炎症和纤维化，从而显著减缓MASH进展。这些发现确立了SORBS1作为MASH潜在新型治疗靶点的意义，并为推进靶向MASH治疗提供了一个潜在候选化合物。
01
研究背景及科学问题
MASLD已成为全球范围内常见的公共卫生负担，影响约30%的成年人。其进展阶段MASH以肝脏脂质积累、炎症和纤维化为主要特征，部分患者可进一步发展为肝硬化和HCC。虽然resmetirom是首个获美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于MASH治疗的药物，但其临床应用仍受到严重胃肠道不良反应和较低应答率等因素限制，因此，临床上仍迫切需要更安全、更有效的MASH治疗策略。近年来，来源于中药的小分子天然产物，如熊果酸、灯盏花素、红景天苷和蒿甲醚等，显示出较大的MASH治疗潜力。因此，发现具有高效、低毒和明确分子靶点的天然产物来源药物，对于推进新型MASH治疗具有重要意义。
WED是一种从传统中药植物Wedelia calendulacea和墨旱莲（Eclipta prostrata L.）中分离得到的特征性香豆素醚类化合物。药理学研究显示，WED具有多种生物活性，包括抗乳腺癌、抗前列腺癌、抗病毒、抗骨关节炎、肝保护、缓解肺损伤，以及对帕金森病和肾损伤的保护作用。近期机制研究表明，WED可通过抑制烟酰胺N-甲基转移酶，并刺激SIRT1/AMPK/PPARα信号通路，促进白色脂肪组织棕色化并增强能量消耗，从而发挥抗肥胖作用。尽管WED的多种生物功能已有较多研究，但其在MASH发病过程中的治疗效果和直接作用靶点仍不清楚。因此，系统评价其抗MASH效果并识别其靶点，是全面理解其潜在分子机制的关键。
SORBS1又称CBL相关蛋白（CBL-associated protein，CAP），是一种多功能适配蛋白，参与调控细胞内信号转导、细胞骨架重塑和细胞黏附。SORBS1失调与多种代谢性、炎症性和恶性疾病密切相关，包括糖尿病、糖尿病肾病、癌症和多囊卵巢综合征。在胰岛素反应性组织中，SORBS1/CAP可通过一种不依赖PI3K的机制，促进胰岛素刺激下葡萄糖转运体GLUT4的膜转位。机制上，SORBS1可将酪氨酸磷酸化的CBL募集到胰岛素受体，触发下游小GTP酶TC10激活，从而增强GLUT4转位和葡萄糖摄取。
临床研究中，胰岛素抵抗性多囊卵巢综合征患者SORBS1表达显著降低；SORBS1-CBL相互作用可抑制PI3K/Akt/NF-κB炎症级联反应，并增强CrkII依赖的GLUT4转运。另一方面，巨噬细胞特异性删除SORBS1可缓解小鼠高脂饮食诱导的胰岛素抵抗。除代谢调节外，SORBS1还具有广泛抗炎作用：它可在病毒性心肌炎损伤中增强I型干扰素产生并抑制促炎细胞因子释放，也可在LPS诱导的系统性炎症中选择性阻断NF-κB依赖的IL-6分泌。整体而言，已有研究表明SORBS1是糖脂代谢和炎症稳态的重要调节因子，但其在MASH发病过程中的具体功能及机制贡献仍未明确。
本研究旨在评价WED对MASH的治疗效果，并识别其直接分子靶点及潜在机制。体内实验确认，WED可显著改善MCD饮食和HFHC饮食诱导MASH小鼠的肝脏炎症和纤维化。利用HuProt™人源蛋白质组芯片，研究者鉴定SORBS1为WED的直接结合靶点。进一步分子验证显示，WED可直接结合SORBS1的VAL32和HIS47残基，增强SORBS1功能活性，减少肝脏脂质积累，并抑制炎症和纤维化进展。为了验证SORBS1在MASH中的病理作用，研究者检测了MASH患者和动物模型中的SORBS1表达水平。结合转录组学、基因敲低和免疫组织化学等分析，研究确认SORBS1是介导WED抗MASH保护作用所必需的关键靶点。总体而言，本研究将SORBS1确立为MASH潜在治疗靶点，并提出WED是首个具有特异性抗MASH效应的天然SORBS1激动剂。
02
重要发现及亮点
WED缓解PAOA诱导的肝细胞脂质积累和炎症反应
为研究WED对肝细胞脂质堆积和炎症反应的调控作用，研究者首先开展体外实验。肝细胞在PAOA刺激存在或不存在的条件下，接受30 μM或60 μM WED处理24 h。Oil Red O和BODIPY荧光染色显示，WED显著减少PAOA诱导的脂滴积累。与此一致，WED明显降低细胞内总胆固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）水平，进一步证实其对脂质积累具有抑制作用。RT-PCR分析显示，WED可抑制PAOA诱导的脂肪酸代谢相关基因上调，包括脂肪酸合酶（fatty acid synthase，Fasn）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（stearoyl-CoA desaturase 1，Scd1）和Cd36。WED还以剂量依赖方式下调PAOA诱导的促炎细胞因子IL-6和TNF-α表达。Western blot进一步验证了WED对FASN、IL-6和TNF-α蛋白表达的抑制作用。类似结果也出现在PAOA刺激的HepG2细胞中。整体而言，这些发现表明WED可有效改善PAOA触发的肝细胞脂质积累和炎症反应。
图1：WED缓解肝细胞脂质堆积和炎症反应。（A）肝细胞经30 μM或60 μM WED处理后的BODIPY和Oil Red O染色代表性图像；比例尺，100 μm。（B）和（C）各指定组肝细胞中的TC和TG水平，n = 6次独立实验。（D–F）采用RT-PCR检测实验组中脂质代谢相关基因Fasn、Scd1和Cd36的mRNA表达水平；n = 6次独立实验。（G–H）肝细胞中促炎基因IL-6和TNF-α的mRNA表达，n = 6次独立实验。（I）采用Western blot检测FASN、IL-6和TNF-α表达，GAPDH作为上样对照，n = 3次独立实验。数据以均值 ± SD表示。*p < 0.05，**p < 0.01，WED+PAOA组 vs PAOA组。 < 0.05，# < 0.01，PAOA组 vs 对照组。
WED减轻MCD饮食诱导的肝脂肪变和纤维化
体外研究已显示WED具有抗脂毒性作用，研究团队此前也验证了其较强的抗肝纤维化活性。在此基础上，作者进一步考察WED是否能够改善MCD饮食诱导的小鼠MASH模型中的肝脂肪变和纤维化。C57BL/6小鼠先接受MCD饮食4周，随后每日灌胃给予40 mg/kg或80 mg/kg WED，连续4周。结果显示，WED显著降低小鼠血清ALT和AST水平。H&E和Oil Red O组织学染色显示，WED治疗可改善MCD饮食诱导的肝脏脂质积累、肝细胞气球样变和炎症浸润。与MCD组相比，WED组肝脏TG和TC水平明显下降。ELISA检测也显示，WED干预后肝脏IL-6和TNF-α水平降低。Masson三色染色显示，MCD模型小鼠存在广泛胶原沉积和纤维化病灶，而WED给药显著减轻肝纤维化。免疫荧光进一步证实，WED显著下调肝脏α-SMA蛋白表达。值得注意的是，80 mg/kg WED的治疗效力与阳性对照药resmetirom相当。整体而言，这些结果说明WED可有效缓解肝脂肪变、炎症和纤维化，显示出较强的抗MASH治疗活性。
图2：WED减轻MCD饮食诱导的肝脂肪变。（A）MCD诱导小鼠MASH的实验设计。（B–C）小鼠血清ALT和AST水平。（D）H&E和Oil Red O染色代表性图像；比例尺，100 μm。（E）NAS评分定量。（F）Oil Red O阳性面积定量。（G–H）肝组织TG和TC水平。（I–J）小鼠肝脏中TNF-α和IL-6水平，n = 6只独立小鼠。（K）Masson三色染色和α-SMA免疫荧光染色代表性图像。Masson三色染色和α-SMA染色阳性面积定量，n = 6只独立小鼠。数据以均值 ± SD表示。*p < 0.05，**p < 0.01，WED+MCD组 vs MCD组。 < 0.05，# < 0.01，MCD组 vs 对照组。
WED缓解HFHC饮食诱导的MASH表型、胰岛素抵抗和纤维化
HFHC饮食诱导的小鼠模型在病理特征上更接近临床MASH患者。随后，研究者使用HFHC饮食诱导的MASH模型开展实验。模型组和WED治疗组小鼠连续16周接受HFHC饮食；在造模最后8周，每日灌胃给予40 mg/kg或80 mg/kg WED；对照组小鼠在整个实验期间接受标准饲料。与HFHC组相比，WED补充显著缓解小鼠体重、肝重以及肝重/体重比的升高。WED组血清ALT和AST浓度明显低于HFHC饮食组，高剂量WED的治疗效果与阳性对照相当。HFHC喂养显著增加肝脏TG和TC含量，而WED治疗可有效减轻过度脂质积累。肝组织病理学分析显示，与HFHC组相比，WED治疗小鼠肝脏炎症和脂质沉积减少，整体组织病理状态改善。
图3：WED缓解HFHC饮食导致的肝损伤和脂肪变。（A）HFHC诱导小鼠MASH的实验流程。（B–D）体重、肝重以及肝重/体重比；n = 6只独立小鼠。（E–F）小鼠血清ALT和AST水平。（G）和（H）小鼠肝组织TG和TC水平。（I）H&E和Oil Red O染色代表性图像；NAS评分定量、比例尺和Oil Red O阳性面积，n = 6只独立小鼠。比例尺，100 μm。数据以均值 ± SD表示。*p < 0.05，**p < 0.01，HFHC+WED组 vs HFHC组。 < 0.05，# < 0.01，HFHC组 vs 对照组。
鉴于胰岛素抵抗、慢性炎症和纤维化是推动MASH进展的关键因素，研究者进一步评估WED对相关代谢、炎症和纤维化标志物的影响。HFHC喂养损害葡萄糖耐量试验（glucose tolerance test，GTT）和胰岛素耐量试验（insulin tolerance test，ITT）结果，并伴随高胰岛素血症和HOMA-IR指数升高，提示存在胰岛素抵抗。WED给药可改善这些异常，使葡萄糖稳态和胰岛素敏感性接近正常水平。此外，WED显著降低HFHC喂养小鼠肝脏中脂肪酸合成相关基因Fasn和Scd1，以及促炎细胞因子IL-6和TNF-α的表达水平。Masson三色染色和免疫荧光显示，WED可减少胶原沉积、纤维增生和α-SMA表达，证实其抗纤维化活性。值得注意的是，在MCD和HFHC诱导的MASH模型中，WED在治疗有效剂量下对肺、心、肝、脾和肾均未显示明显毒性。上述结果表明，WED可缓解HFHC触发的肝脂肪变、炎症、纤维化和胰岛素抵抗，提示其具有作为MASH治疗候选药物的潜力。
图4：WED缓解HFHC诱导MASH中的胰岛素抵抗、炎症和纤维化。（A）空腹血糖水平。（B–G）HFHC喂养小鼠的血浆胰岛素、HOMA-IR、GTT及其对应AUC、ITT及其对应AUC，n = 6只独立小鼠。（H–I）脂质代谢相关基因Fasn和Scd1的mRNA表达水平，n = 6只独立小鼠。（J–K）小鼠肝脏中促炎细胞因子表达。（L）Masson三色染色和α-SMA免疫荧光染色代表性图像。Masson三色染色和α-SMA染色阳性面积定量，n = 6只独立小鼠。比例尺，100 μm。数据以均值 ± SD表示。*p < 0.05，**p < 0.01，HFHC+WED组 vs HFHC组。 < 0.05，# < 0.01，HFHC组 vs 对照组。
SORBS1是WED的直接细胞内靶蛋白
为识别WED的直接细胞内靶点，研究者在WED的5-OH位点引入生物素基团，获得生物素偶联WED探针（WED-bio），并通过核磁共振波谱确认其化学结构。已有研究表明，该位点修饰不会改变WED生物活性。随后，研究者利用HuProt™人源蛋白质组芯片系统筛选WED相互作用蛋白。蛋白芯片与WED-bio孵育后，使用Cy5标记链霉亲和素检测结合蛋白，从而识别直接相互作用蛋白。最终共筛选出541个候选蛋白，筛选标准为信噪比（signal-to-noise ratio，SNR）≥1且Z-score≥2。其中，SORBS1具有最高SNR（4.432）和Z-score（6.605），因此成为WED主要候选靶蛋白。
分子对接分析进一步预测WED与SORBS1之间可形成稳定结合，计算得到结合自由能为−7.64 kJ/mol。SPR实验确认二者具有较强结合亲和力，解离常数（KD）为1.577 μM。CETSA实验显示，与DMSO对照组相比，WED处理细胞中SORBS1热稳定性明显增强，进一步验证其在活细胞内的直接相互作用。综合多种互补实验结果，研究确认SORBS1是WED的直接细胞内靶点。
图5：SORBS1是WED的直接细胞内靶蛋白。（A）WED-Bio结构。（B）利用蛋白质组芯片筛选WED靶蛋白的策略示意图。（C）蛋白芯片筛选结果。（D）SORBS1具有最高SNR和Z-score。（E）WED与SORBS1的分子对接结果。（F）采用SPR研究WED与SORBS1之间的相互作用。（G）CETSA分析显示，WED处理显著增强SORBS1蛋白热稳定性，n = 3次独立实验。
VAL32和HIS47参与WED与SORBS1之间的相互作用
为阐明WED与SORBS1之间的关键结合位点，研究者进行了MD模拟并表征二者的分子间相互作用。在100 ns模拟过程中，WED–SORBS1复合物的均方根偏差（root-mean-square deviation，RMSD）保持在1.5–3 Å范围内，提示整体构象稳定。与未结合SORBS1相比，复合物RMSD值略低，说明WED结合可增强蛋白结构稳定性。进一步分析显示，WED在整个模拟过程中稳定停留于结合口袋内，构象变化较小。关键结构参数变化趋势一致，提示WED结合后SORBS1结构变得更加紧凑、刚性更强，并形成稳定复合物构象。
氢键定量分析显示，复合物中氢键数量稳定维持在4–6个之间，分布密集且未出现明显破坏，说明稳定氢键网络对配体结合稳定性具有重要作用。Gibbs自由能分析进一步从热力学层面确认，WED结合可显著稳定SORBS1结构，并可能促进其生物学功能。WED与SORBS1结合自由能（ΔGbind）为−21.90 kcal/mol，其中范德华相互作用和静电相互作用是主要驱动力。自由能分解分析识别出VAL32和HIS47是对结合自由能贡献最显著的关键残基。为验证计算预测，研究者构建VAL32Ala突变体、HIS47Ala突变体及对应双突变体，并开展pull-down实验。结果显示，与野生型蛋白相比，每种突变均明显削弱WED与SORBS1之间的结合亲和力。整体而言，这些结果表明VAL32和HIS47是介导WED与SORBS1直接相互作用的关键氨基酸残基。
图6：VAL32和HIS47参与WED与SORBS1之间的相互作用。（A）基于分子动力学模拟获得的SORBS1蛋白和复合物RMSD分析。（B）WED的RMSD分析。（C）复合物RMSF分析。（D）复合物Rg轨迹。（E）复合物SASA动态变化。（F）复合物中氢键随时间变化情况。（G–H）蛋白复合物Gibbs自由能景观。（I）复合物结合自由能。（J）残基结合能贡献分析。（K）细胞转染SORBS1及其突变质粒后的pull-down实验结果。数据以均值 ± SD表示，n = 3次独立实验。
转录组学揭示WED通过下调脂质代谢、炎症和纤维化相关基因缓解HFHC诱导的MASH
为探索WED缓解HFHC饮食诱导MASH的潜在机制，研究者对各实验组肝组织进行RNA测序。主成分分析显示，不同处理组样本之间分离和聚类清晰。WED组与HFHC组差异表达基因火山图显示，WED给药显著上调肝脏SORBS1表达。KEGG通路富集分析提示，WED主要调节脂质代谢相关通路，如PPAR通路；炎症相关通路，如TNF通路；以及胰岛素信号通路。基于KEGG结果构建的热图进一步证实，在HFHC饮食喂养16周的小鼠中，WED可明显抑制脂质代谢、炎症和纤维化相关基因表达。总体而言，这些数据说明，WED可缓解代谢应激诱导的肝脏脂肪积累、炎症和纤维化，从而发挥较强抗MASH治疗作用。
图7：转录组学显示，WED通过下调脂质代谢、炎症和纤维化相关基因缓解HFHC饮食诱导的MASH。（A）RNA-seq数据PCA分析。（B）WED组与HFHC组之间存在显著差异的RNA-seq数据火山图，n = 4只独立小鼠。（C）与PPAR信号通路、TNF信号通路和胰岛素信号通路相关的KEGG通路，n = 4只独立小鼠。（D–F）WED组vs HFHC组中脂质代谢、炎症和纤维化相关差异表达基因热图，n = 4只独立小鼠。
WED直接结合SORBS1并调控CBL/TC10/GLUT4和TNF-α信号通路
既往研究提示，SORBS1对调节胰岛素敏感性和炎症反应至关重要。机制上，SORBS1可上调CBL和TC10表达，促进GLUT4膜转位，从而改善胰岛素抵抗；同时，它还能抑制TNF-α和IL-6合成。基于这些观察，研究者进一步考察WED是否通过SORBS1介导的CBL/TC10/GLUT4和TNF信号通路发挥抗MASH保护作用。结果显示，与HFHC诱导的MASH小鼠相比，40 mg/kg或80 mg/kg WED给药显著提高肝脏SORBS1、CBL、TC10和GLUT4蛋白表达，同时降低炎症因子TNF-α、IL-6以及纤维化指标COL1A1、YAP、TAZ和α-SMA。WED在MCD饮食诱导MASH模型中也对炎症和纤维化相关蛋白产生类似调控作用。整体而言，研究结果表明WED可激活SORBS1，调节糖脂代谢、炎症和纤维化，最终延缓MASH进展。
图8：WED通过激活SORBS1调控糖脂代谢、炎症和纤维化相关通路，从而缓解HFHC饮食诱导的MASH。（A）Western blot分析HFHC饮食喂养16周小鼠中代谢信号通路蛋白CBL、TC10和GLUT4，炎症信号通路蛋白TNF-α和IL-6，以及纤维化信号通路蛋白YAP、TAZ、α-SMA和COL1A1级联变化，GAPDH作为对照，n = 3只独立小鼠。（B–K）蛋白表达水平统计分析。数据以均值 ± SD表示。*p < 0.05，**p < 0.01，WED+HFHC组 vs HFHC组。 < 0.05，# < 0.01，HFHC组 vs 对照组。
SORBS1敲低削弱WED对脂质积累、炎症和纤维化的抑制作用
为明确SORBS1是否介导WED对脂质积累、胰岛素抵抗、炎症和纤维化的抑制作用，研究者使用小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）敲低肝细胞SORBS1表达。在PAOA刺激下，si-SORBS1转染明显降低SORBS1表达。SORBS1敲低加重PAOA触发的脂质积累，升高TNF-α和IL-6等促炎因子，并下调CBL、TC10和GLUT4表达。进一步结果显示，SORBS1敲低逆转了WED对PAOA诱导脂质积累和炎症反应的抑制作用，说明WED效应由SORBS1激活介导。
为研究WED是否通过SORBS1调控肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）活化，作者建立肝细胞-肝星状细胞共培养体系，并评估WED对此相互作用的影响。在TGF-β1刺激的LX-2细胞中，WED显著降低COL1A1、YAP、TAZ和α-SMA表达；而SORBS1敲低完全消除了这一抗纤维化作用，提示WED对肝纤维化的保护依赖SORBS1。由于胰岛素可触发GLUT4从细胞内囊泡转位至质膜以增加细胞葡萄糖摄取，研究者进一步探索WED是否在胰岛素抵抗条件下通过SORBS1调控这一过程。免疫荧光显示，高糖处理降低细胞膜上GLUT4富集，而WED处理可显著恢复eGFP-GLUT4膜定位；SORBS1敲低则完全阻断WED诱导的GLUT4膜转位。上述结果说明，SORBS1对WED促进胰岛素刺激下GLUT4转运是不可或缺的。总结而言，WED通过靶向SORBS1调控CBL/TC10/GLUT4和TNF-α信号通路，从而发挥胰岛素增敏、抗炎、调脂和抗肝纤维化等多重药理作用。
图9：WED对脂质积累、炎症反应和纤维化过程的影响由SORBS1介导。（A）采用BODIPY染色评估HepG2细胞在PAOA刺激24 h后，经载体（Veh）或WED处理，并伴随或不伴随si-SORBS1时的脂质积累情况。比例尺，100 μm。（B）HepG2细胞中的TG浓度，n = 3次独立实验。（C）Western blot检测PAOA刺激后HepG2细胞中SORBS1、CBL、TC10、GLUT4、TNF-α和IL-6蛋白表达水平。GAPDH作为内参用于标准化，n = 3次独立实验。（D–I）蛋白表达统计分析。（J）WED影响肝细胞与活化HSC相互作用的示意图。（K–O）Western blot分析并定量检测LX-2细胞中COL1A1、YAP、TAZ和α-SMA蛋白表达，GAPDH作为上样对照，n = 3次独立实验。# < 0.01 vs con；**p < 0.01，***p < 0.001 vs Veh组或线条所示组间比较；ns表示无显著性差异。
AAV8介导的肝细胞特异性SORBS1敲低加重MASH并消除WED保护作用
尽管既往研究提示SORBS1参与糖脂代谢和炎症调控，但其在MASH发病中的具体功能和机制仍不清楚。为进一步验证SORBS1是否在体内介导WED抗MASH治疗作用，本研究采用AAV8介导的shRNA系统，在小鼠肝脏中实现肝细胞特异性SORBS1敲低，并在HFHC饮食诱导的MASH模型中给予WED治疗。在正常饮食条件下，注射AAV8-shSORBS1的小鼠与AAV8-vector对照小鼠相比，未出现明显一般健康状态或肝组织病理变化。相反，在HFHC喂养的MASH小鼠中，SORBS1敲低明显加重肝脏脂质沉积和肝细胞气球样变。虽然SORBS1敲低组体重与AAV8-vector对照组相近，但肝重和肝重/体重比明显升高。此外，小鼠出现空腹血糖升高和葡萄糖耐量受损，提示胰岛素抵抗加重。
机制上，SORBS1敲低升高血清ALT和AST水平，并增加肝脏TC和TG积累。与这些结果一致，脂质代谢相关基因Fasn、Scd1和Cd36，促炎因子TNF-α和IL-6，以及纤维化标志物α-SMA和collagen均明显升高。值得注意的是，SORBS1消融几乎完全消除了WED对MASH小鼠肝功能、糖脂代谢稳态、肝脏炎症和肝纤维化的保护作用。整体来看，这些发现证明SORBS1缺失会加速MASH进展，而WED的治疗效应依赖肝脏中SORBS1的正常表达。因此，SORBS1代表MASH治疗的一个潜在新靶点。
图10：SORBS1敲低逆转WED诱导的MASH改善作用。（A）H&E和Oil Red O染色代表性图像；比例尺，100 μm。（B）NAS评分和Oil Red O阳性面积定量，n = 6只独立小鼠。（C–E）体重、肝重以及肝重/体重比，n = 6只独立小鼠。（F–H）血糖、GTT及其对应AUC，n = 6只独立小鼠。（I–L）小鼠血清ALT和AST水平；小鼠肝组织TG和TC水平，n = 6只独立小鼠。（M）Masson三色染色和α-SMA免疫荧光染色代表性图像。Masson三色染色和α-SMA染色阳性面积定量，n = 6只独立小鼠。比例尺，100 μm。（N–P）小鼠肝脏脂质代谢相关基因Fasn、Scd1和Cd36的mRNA表达水平，n = 6只独立小鼠。（Q–R）小鼠肝脏中促炎细胞因子TNF-α和IL-6表达，n = 6只独立小鼠。数据以均值 ± SD表示。 < 0.05，# < 0.01，HFHC组 vs 对照组；*p < 0.05，**p < 0.01，HFHC+WED组 vs HFHC组；&p < 0.05，&&p < 0.01，HFHC组 vs HFHC+AAV8-SORBS1组；ns表示无显著性差异，HFHC+AAV8-SORBS1组 vs HFHC+AAV8-SORBS1+WED组。
SORBS1是MASH治疗的潜在靶点
为进一步阐明SORBS1在MASH中的临床意义，研究者分析GEO数据库GSE48452和GSE89632数据，发现与健康个体相比，MASH患者肝脏SORBS1 mRNA表达显著降低。此外，SORBS1转录水平与纤维化标志基因COL1A1显著负相关。与临床样本观察一致，在MCD饮食和HFHC饮食诱导的经典小鼠MASH模型中，肝脏SORBS1 mRNA表达相较对应对照组均明显受到抑制。免疫组织化学染色进一步验证，不同临床阶段MASH患者肝组织中SORBS1蛋白表达降低，并且SORBS1下调与COL1A1蛋白升高显著负相关。上述临床观察也在体内动物实验中得到重复验证，即MCD和HFHC喂养的小鼠肝脏SORBS1表达下降。总体而言，这些数据提示，异常SORBS1表达与MASH相关肝纤维化密切相关，SORBS1可能是MASH治疗的潜在靶点。
图11：SORBS1与MASH进展相关。（A–B）GEO数据库GSE48452和GSE89632中SORBS1转录表达分析。（C）在GSE48456中，采用Spearman相关系数（r）测定SORBS1与COL1A1 mRNA水平之间的相关性。（D–E）MCD饮食或HFHC饮食维持小鼠肝组织中SORBS1 mRNA表达，n = 6只独立小鼠。（F–G）正常肝组织和患者肝组织中SORBS1及COL1A1免疫组织化学（IHC）染色。比例尺，100 μm。（H）MCD或HFHC饮食喂养小鼠肝脏SORBS1 IHC染色，n = 6只独立小鼠。比例尺，100 μm。数据以均值 ± SD表示。**p < 0.01，MCD或HFHC组 vs 对照组。
【贡献】★★★★★
本研究表明，WED可通过直接结合并调控SORBS1，对饮食诱导的MASH发挥较强治疗作用。机制上，WED结合SORBS1后，通过CBL/TC10/GLUT4轴重塑肝脏糖脂代谢稳态，从而恢复胰岛素敏感性，并抑制TNF信号通路触发的肝脏炎症。这种双重调节作用可综合减轻肝脏脂质沉积、炎症损伤和纤维化进展。尤其重要的是，遗传性消融SORBS1会完全阻断WED的治疗效应，验证SORBS1是WED发挥作用所必需的功能靶点。总体而言，这些发现确立SORBS1为MASH潜在治疗靶点，并为抗MASH药物开发提供了一种作用机制明确的天然先导化合物。
作者同时指出，本研究仍存在若干需要进一步探索的局限。首先，WED是否通过调节骨骼肌和脂肪组织中的胰岛素抵抗而发挥抗MASH作用，目前仍不清楚。其次，研究缺少功能获得和救援实验，因此尚不能完全排除SORBS1下游其他信号通路或补偿机制的参与。第三，WED在体内的药代动力学参数，包括吸收、分布、代谢和排泄过程，仍需系统表征。尽管本研究较为充分地验证了WED对饮食诱导MASH进展的保护作用，但未来若要支持其临床转化，仍需要开展大规模临床试验和严格的安全性评估。
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