非洲猪瘟病毒这些年的"花样"是真不少。
自2018年国内首次出现非洲猪瘟Ⅱ型毒株疫情以来，短短几年时间，不同基因型、不同毒力的毒株相继被报道——
- 2020年6月，发现了CD2v自然突变或缺失毒株，中等毒力、高传播性；
- 2021年6月，山东、河南首次发现基因Ⅰ型毒株，低致病性但传播力强；
- 与此同时，市场上还面临着CD2v、MGF基因缺失毒株、I177L基因缺失疫苗株，以及其他携带eGFP、mCherry荧光标记基因的人工改造毒株的威胁；
- 到了2023年5月，哈兽研首次报道了非洲猪瘟Ⅰ/Ⅱ型重组毒株（嵌合毒株），它和基因Ⅱ型强毒株很相似，高致死性、强传播力，是目前最需要警惕的类型之一。
【配图1：重组ASFV基因组结构示意图】
问题来了：毒株类型这么多，特别是这个新出现的Ⅰ/Ⅱ型嵌合毒株，养殖企业该怎么及时、准确地鉴别？
目前主流的鉴别方案有两种：全基因组测序和荧光定量PCR检测。
先说测序。全基因组测序无疑是最权威、最准确的方法。以往的非洲猪瘟毒株，只需要对用于基因分型的p72核苷酸片段测序，就能给出明确的分型结论。
但嵌合毒株不一样。它的基因组由10个基因Ⅰ型同源片段和10个基因Ⅱ型同源片段呈不连续性交叉式排布组成——p72来源于基因Ⅰ型毒株，而CD2v来源于基因Ⅱ型毒株。要鉴别它，得同时对多个基因片段测序，成本和时效性都是巨大的挑战。
再说荧光定量PCR（qPCR）。过去鉴别非瘟Ⅰ型，靠的是特异性检测p72序列上的4个碱基差异。但嵌合毒株的出现打破了这套逻辑——仅检测p72，已经无法同时区分非瘟Ⅰ型毒株、Ⅱ型毒株和Ⅰ/Ⅱ型嵌合毒株。
【配图2：基因Ⅰ型、Ⅱ型毒株与Ⅰ/Ⅱ型嵌合毒株的基因序列差异位点比对图（VIC/CY5/FAM）】
好消息是，随着哈兽研对Ⅰ/Ⅱ型嵌合毒株的深入研究，其科研成果为基于荧光定量PCR进行基因分型提供了更多理论依据。如图所示，Ⅰ/Ⅱ型嵌合毒株、I型毒株和II型毒株之间存在着明确的基因序列差异位点。基于这些位点，采用一款多联检试剂，一次上机，就能实现低成本的鉴别——Ⅰ/Ⅱ型嵌合毒株、I型毒株（弱毒）和II型毒株，为非瘟防控提供更及时准确的决策依据。
【配图3：非瘟嵌合毒株三重鉴别试剂测评结果】
准确度如何？为验证荧光定量PCR方法鉴别这三种毒株的准确性，某公司将检测结果与测序结果进行了对比，结果完全吻合（见上表）。
【配图4：非洲猪瘟病毒检测方案流程图】
当然，田间的毒株类型更加复杂多样，临床上还可能存在混合感染。要把非瘟防控做到"精准"二字，建议在常规阳性（p72）筛查的基础上，进一步做Ⅰ/Ⅱ型嵌合毒株、Ⅰ型毒株、Ⅱ型毒株的三重鉴别，再根据毒株类型选择后续检测路径，并结合抗体监测综合判断。
毒株在变，检测方案也得跟上。你所在的猪场用的是哪种方案？欢迎在评论区聊聊。
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